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更新時間:2017-07-10 10:19:18瀏覽次數(shù):151次
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凍存細胞蛋白提取試劑盒50T售后服務(wù)實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
凍存細胞蛋白提取試劑盒50T售后服務(wù)注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
EFNB2 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 標簽)
人內(nèi)臟脂肪細胞*培養(yǎng)基 100mL
TNFRSF11A Others Rat 大鼠 TNFRSF11A 人細胞裂解液 (陽性對照)
RLE-6TN細胞,大鼠肺上皮Ⅱ型細胞 PC-3(人前列腺癌細胞) 大鼠肝細胞;BRL 3A
人滑膜細胞cDNAHS cDNA
16HBE(人支氣管上皮樣細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;SH3
小鼠前胃癌細胞;MFC
CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-R114大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL
KYSE70細胞,人食管鱗癌 神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞,SHG-44細胞 豬腎傳代細胞;IBRS-2
CFPAC-1(人胰腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
TNFSF8 Others Human 人 CD30 Ligand / TNFSF8 人細胞裂解液 (陽性對照)
ITGA5&ITGB6 Others Human 人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照)
人纖維肉瘤細胞;HT-1080
CL-0465WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞)5×106cells/瓶×2
BRL細胞,肝細胞 人前列腺癌細胞,9L-E細胞 人上皮細胞RNAHMEpiC miRNA5 μg
獼猴肌肉細胞;MMm7
ENG Others Human 人 Endoglin / CD105 / ENG 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠IgE-Fc片段受體Ⅱ(FcεRⅡ)ELISA試劑盒 ,英文名: FcεRⅡ ELISA Kit
人受體*激酶(RTKs)ELISA檢測試劑盒Humanreceptortyrosinekinase,RTKsELISAKit 96T/48T
大鼠骨保護素(OPG)免疫試劑盒 Rat Osteoprotegerin,OPG ELISA KIT
CLIAKitforVPI(Humanvasopeptidaseinhibitors)ELISAKit人血管活性肽酶抑制劑規(guī)格:48T/96T
麥芽β-葡聚糖酶比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitankyrin人錨蛋白規(guī)格:48T/96T
人轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human free chorionic gonadotropin (f- hCG) ELISA Kit 人游離β絨毛膜*(f-βhCG)ELISA試劑盒
HumanHeparanase,HPAELISAkit 人乙酰肝素酶(HPA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
humanHepatitisDvirusIgG,HDVIgGELISA試劑盒人丁型肝炎IgG(HDVIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織*過氧化物酶(GSHPX)活性比色法定量檢測試劑盒20次
Humanmacrophageinflammatoryprotein2,MIP-2ELISAKit人巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
凍存細胞蛋白提取試劑盒50T售后服務(wù)大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠神經(jīng)降壓肽(NT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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