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更新時(shí)間:2017-07-10 10:01:53瀏覽次數(shù):126次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
考馬斯亮藍(lán)快速染色液100ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
考馬斯亮藍(lán)快速染色液100ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113, His 標(biāo)簽)
人輸尿管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CD2 Others Rat 大鼠 CD2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
B16BL6細(xì)胞,小鼠黑色素瘤細(xì)胞 VERO C1008 (E6)(非洲綠猴腎細(xì)胞) EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM932
人男性正常細(xì)胞;Hs68
SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
食管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
DYRK3 Others Human 人 DYRK3 / REDK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);F9-CAG-tTA-4D6
COLO 205細(xì)胞,結(jié)腸癌細(xì)胞 正常人肝細(xì)胞,L-02細(xì)胞 CL-0056CCD-1095Sk(人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WD10
CLEC4M Others Human 人 CD299 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
IL6ST Others Human 人 IL6ST / gp130 / CD130 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞;786-O [786-0]
CM-R074大鼠心肌成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
GES-1細(xì)胞,人胃粘膜細(xì)胞 人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞,SH-SY5Y細(xì)胞 大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-5
CoC1(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
PVR Others Human 人 PVR / CD155 / NECL5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
大鼠*(Cortisol)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人絲蟲病抗體(IgG4)免疫試劑盒 Human filariasis(philariasis)antibody IgG4 ELISA kit
二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)試劑盒 紫外分光光度法 25管/24樣
Raturokinase,UKELISA試劑盒大鼠*(UK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLungresistance-relatedprotein,LRPELISA試劑盒人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanpancreatickininogenase,PKELISAKit人*(PK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
山羊孤啡肽(OFQ/N)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human glucagon like peptide 1 (GLP-1) ELISA Kit 人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒
HumanEndothelialnitricoxidesynthase3,eNOS-3ELISAKit 人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humangrowth-regulatedoncogeneγ/melanomagrowthstimulatingactivity,GROγ/MGSAELISA試劑盒人生長調(diào)節(jié)致癌基因γ/黑素瘤生激因子(GROγ/CXCL3/MGSA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織二脂酰甘油(DAG)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
Humanmelanocytestimulatinghormone,MSHELISAKit人黑色素細(xì)胞刺激素(MSH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
考馬斯亮藍(lán)快速染色液100ml實(shí)驗(yàn)方法大鼠載脂蛋白A2(apo-A2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠載脂蛋白A(apo-A)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠孕激素/孕(PROG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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