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5×非變性蛋白上樣緩沖液10ml免費(fèi)代測(cè)

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5×非變性蛋白上樣緩沖液10ml免費(fèi)代測(cè)實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
5×非變性蛋白上樣緩沖液10ml免費(fèi)代測(cè)注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
CCL17 Protein Human 重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白

人腎上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

IL10RB Others Rat 大鼠 IL10RB / IL10R2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

B16F10細(xì)胞,小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞) SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞;hFOB 1.19

人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5

SHG-44 (人膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CM-R111大鼠雪旺氏細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

ECD Others Human ECD / Ecdysoneless homolog 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

豬角膜上皮細(xì)胞PCEpiC

非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1 人單核細(xì)胞,THP-1細(xì)胞 Caco-2(結(jié)腸腺癌細(xì)胞)

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0919

EFNB2 Others Mouse 小鼠 EFNB2 / EphrinB2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人表皮角質(zhì)細(xì)胞-新生兒(HEK-n)( 5×105 )

人腎透明細(xì)胞癌;Caki-1

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞

人十二脂腸腺癌;HuTu-80 大鼠前列腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

NFS-60 小鼠白血病細(xì)胞G-CSF依賴性

ECE1 Others Human ECE1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
大鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)免疫試劑盒 Human mitogen-activated protein kinase kinase 6,MAP2K6 ELISA kit

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)試劑盒 紫外分光光度法 50/48

Raturokinaseplasminogenactivator,uPAELISA試劑盒大鼠*型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

humanlungcancerMarkerELISA試劑盒人肺癌標(biāo)志物ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanPancreaticPolypeptide,PPELISAKit人胰多肽(PP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
山羊骨形成蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒 組裝/原裝

Rat free three iodothyronine (Free-T3) ELISA Kit 大鼠游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒

HumanCytochrome-C,Cyt-CELISAKit 人細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humangrowth-regulatedoncogeneβ/melanomagrowthstimulatingactivity,GROβ/MGSAELISA試劑盒人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織二胺氧化酶(DAO)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20

HumanMelanomaMarkerA,MART/Melan-AELISAKit人黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
5×非變性蛋白上樣緩沖液10ml免費(fèi)代測(cè)大鼠再生基因蛋白IVREG-4ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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