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更新時(shí)間:2017-07-10 10:00:41瀏覽次數(shù):177次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
SDS-PAGE 電泳液(粉劑)(5X)1L實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
SDS-PAGE 電泳液(粉劑)(5X)1L實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
SDS-PAGE 電泳液(粉劑)(5X)1L實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
CXCL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CD7 Others Rat 大鼠 CD7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
EL4.IL-2細(xì)胞,小鼠淋巴瘤細(xì)胞 Mo-MuLv/3T3(Mo-MuLv感染的3T3細(xì)胞) 人皮膚成纖維樣細(xì)胞;HSF2
人整合SV40基因的上皮細(xì)胞;HBL-100 [HBL100]
Sf-21(昆蟲細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
小鼠黑色素瘤瘤株;B16
EDA2R Others Mouse 小鼠 XEDAR / EDA2R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
D341Med細(xì)胞,人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 藤黃微球菌/騰黃八疊球菌 貓腎細(xì)胞;CRFK
CCL3 Protein Mouse 重組小鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白
NIH/3T3(小鼠胚胎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 EVI2A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(MOPC)(5×105)
人腎上皮細(xì)胞總RNAHREpiC tRNA
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 cDNA
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));DG6-VAP33-GFP 小鼠表皮黑色素細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 Mouse
LRPAP1 Others Mouse 小鼠 LRPAP1 / RAP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
大鼠破骨細(xì)胞分化因子(ODF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人死亡相關(guān)蛋白1(DAP/DAP1)免疫試劑盒 Human Death-associated protein 1,DAP/DAP1 ELISA kit
甜菜堿含量測(cè)定試劑盒 可見分光光度法 50管/48樣
RatUltrasensitivityTri-iodothyronine,u-T3ELISA試劑盒大鼠高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanlumican,LUMELISA試劑盒人基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白(LUM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanPancreaticcarcinomamarkers-CA242ELISAKit人胰腺癌標(biāo)志物CA242ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
山羊*(Cortisol)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human amylin (Amylin) ELISA Kit 人胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒
humanhepatitisBvirus,HBVpreS2AbELISAKit 人乙型肝炎病毒前S2抗體(HBVpreS2Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humangrowthhormone,HGHELISA試劑盒人生長(zhǎng)激素(HGH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織多聚ADP核糖聚合酶-1(PARP-1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
HumanMelatonin,MISAKit人褪黑素(MT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
SDS-PAGE 電泳液(粉劑)(5X)1L實(shí)驗(yàn)方法大鼠中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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