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更新時間:2017-07-10 10:00:04瀏覽次數(shù):215次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)Tris-*電泳緩沖液(5×SDS-PAGE)100ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Tris-*電泳緩沖液(5×SDS-PAGE)100ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
CXCL12 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
人子宮頸上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CD59 Others Rat 大鼠 CD59 / CD59A / MAC-IP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Yac-1細(xì)胞,小鼠淋巴瘤細(xì)胞 PA317(成纖維細(xì)胞) 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(傣族);KM9403
Saos-2(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 Ephrin-A4 / EFNA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人絨毛間葉成纖維細(xì)胞cDNAHVMF cDNA
EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
胎兒真皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CFSC-3H & 5H細(xì)胞,大鼠肝星形細(xì)胞 SK-N-SH(神經(jīng)母細(xì)胞瘤) 大鼠垂體瘤細(xì)胞;GH3
EFNA5 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (His 標(biāo)簽)
YAC-1(小鼠淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠肺腺癌細(xì)胞系;LA795
LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人腎皮質(zhì)上皮細(xì)胞RNAHRCEpiC miRNA5 μg
新生牛眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞;NBTF
HCT-15細(xì)胞,人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞,OCM-1細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LoVo
Hepa 1-6(小鼠肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
ACVR1 Others Human 人 ALK-2 / ACVR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人四氫生物蝶呤(BH4)免疫試劑盒 Human tetrahydrobiopterin,BH4 ELISA Kit
線粒體檸檬酸(MCA)含量測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
Ratultrasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISA試劑盒大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanL-phenylalanine,LPAELISA試劑盒人苯*(LPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanPancreastatinELISAKit人胰抑制素(Pancreastatin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
山羊血小板衍化生長因子(PDGF)ELISA試劑盒 組裝/原裝
Human islet cell antibody / antigen 2 protein tyrosine phosphatase antibody (IA-2A) ELISA Kit 人胰島細(xì)胞抗原2抗體/蛋白*磷酸酶抗體(IA-2A)ELISA試劑盒
HumanHepatitisGvirusIgM,HGV-IgMELISAKit 人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRPELISA試劑盒人生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織多胺氧化酶(PAO)活性比色法定量檢測試劑盒20次
Humanmembranecofactorprotein,MCPELISAKit人膜輔蛋白(MCP/CD46)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Tris-*電泳緩沖液(5×SDS-PAGE)100ml使用說明書大鼠特異生長因子/相關(guān)因子(TSGF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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