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蛋白銀染試劑盒250T實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-10 09:57:27瀏覽次數(shù):166次

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蛋白銀染試劑盒250T實(shí)驗(yàn)方法公司供應(yīng)的細(xì)胞生物學(xué)試劑品種齊全,質(zhì)量保證,*,歡迎廣大科研用戶(hù)選購(gòu)!

蛋白銀染試劑盒250T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線(xiàn)粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線(xiàn)粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀(guān)察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
蛋白銀染試劑盒250T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀(guān)察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
CCL14 Protein Human 重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (aa 28-93, His 標(biāo)簽)

人子宮平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

CD99 Others Rat 大鼠 CD99 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

C127細(xì)胞,小鼠細(xì)胞 Y1(腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞) 人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5

人胰腺癌細(xì)胞;PANC-1

RKO(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人前列腺平滑肌細(xì)胞cDNAHPSMC cDNA

EED Others Human EED / Embryonic Ectoderm Development 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

雜交瘤(B類(lèi));C3110D2B2

BT549細(xì)胞,管癌細(xì)胞 人喉癌細(xì)胞,M4e細(xì)胞 大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1)

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A4

NCR3 Others Human NKp30 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
BST1 Others Rat 大鼠 CD157 / BST1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人腎近曲小管上皮細(xì)胞總RNAHRPTEpiC tRNA

人滑膜細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

CHO-pt細(xì)胞,轉(zhuǎn)血小板基因倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 L6(大鼠成肌細(xì)胞) 615小鼠癌瘤株;Ca761

EFNA4 Protein Human 重組人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

U251(人膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;C3H 10T1/2 2A6
大鼠前列腺素F(PGF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人酸性磷酸酶(ACP)免疫試劑盒 Human Acid Phosphatase,ACP ELISA Kit

α-半乳糖苷酶(α-GAL)測(cè)試盒 可見(jiàn)分光光度法 50/24

Rattumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand4,TRAILR4ELISA試劑盒大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humanlowmolecular-weightprotein/proteasomebeta-typesubunit,LMP7/PSMB9ELISA試劑盒人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanoxytocinOISAKit人催產(chǎn)素(OT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human insulin like growth factor binding protein 4 (IGFBP-4) ELISA Kit 人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒

humanHepatitisDvirusIgG,HDVIgGELISAKit 人丁型肝炎IgG(HDVIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumangranzymesA,Gzms-AELISA試劑盒人顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織短鏈脂酰輔酶A氧化酶(acyl-CoAoxidase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

Humanmetanephrine,MNELISAKit人變腎上腺素(MN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
蛋白銀染試劑盒250T實(shí)驗(yàn)方法鵝催乳素(PRLELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

鵝促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

鵝促黃體激素(LH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

鵝雌激素(E)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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