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更新時間:2017-07-10 09:57:11瀏覽次數(shù):143次
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蛋白銀染試劑盒1000T免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
蛋白銀染試劑盒1000T免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人胎盤絨毛膜細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
LILRA5 Others Rat 大鼠 LILRA5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
MA-891細(xì)胞,小鼠癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 L929(成纖維細(xì)胞) 人葡萄膜黑色素細(xì)胞;UM
人肝癌細(xì)胞;Hep G2 [HepG2]
RH-35(大鼠肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N8 (A/mallard/Netherlands/33/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
臍動脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
EFNA1 Others Rat 大鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠輸尿管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
OKT 11雜交瘤細(xì)胞抗CD2 OKT 11 hybridoma cells against CD2 IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBS
IGFBP4 Protein Human 重組人 IGFBP4 蛋白 (His 標(biāo)簽)
HFF-1(人成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 克雷伯肺炎桿菌
LTF Others Human 人 LTF / Lactoferrin / Lactotransferrin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人腎近曲小管上皮細(xì)胞RNAHRPTEpiC miRNA5 μg
Panc10.05 胰腺腺癌
CL-0450SW 982(人滑膜肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人腦血管平滑肌細(xì)胞
*;HEL 人小腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
小鼠抗繆勒管激素(AMH)ELISA試劑盒 ,英文名: AMH ELISA Kit
人酸性神經(jīng)鞘磷脂酶(ASM)ELISA檢測試劑盒Humanacidsphingomyelinase,ASMELISAKit 96T/48T
大鼠血紅素氧合酶1(HO-1)免疫試劑盒 Rat heme oxygenase 1,HO-1 ELISA Kit
英文名稱Ratlipoprotein-associatedphospholipaseA2ELISAKit大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)ELISAKit規(guī)格:96T/48T
高分子蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣100次
ELISAKitFP-S人游離蛋白S規(guī)格:48T/96T
兔6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat free chorionic gonadotropin (f- CG) ELISA Kit 大鼠游離β絨毛膜*(f-βCG)ELISA試劑盒
HumanHepatitisCvirusIgM,HCV-IgMELISAKit 人丙型肝炎IgM(HCV-IgM)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humangranulysin,GNLYELISA試劑盒人顆粒溶素(GNLY)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織短鏈脂酰輔酶A脫氫酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測試劑盒20次
HumanMethemoglobin,MHBELISAKit人高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
蛋白銀染試劑盒1000T免費代測鵝固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1(SREBP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
鵝*還原酶(GSH-PX)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
鵝睪(T)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
鵝*(CH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原
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