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更新時(shí)間:2017-07-10 09:46:53瀏覽次數(shù):371次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
Tween20/TBS溶液(20×TBST,pH7.5)500ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
Tween20/TBS溶液(20×TBST,pH7.5)500ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
XCL1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 XCL1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人直腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
PIK3IP1 Others Human 人 PIK3IP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
RBL-2H3細(xì)胞,大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞 敗毒梭菌Clostridium septicum 非洲綠猴腎細(xì)胞;Vero E6
人胃癌細(xì)胞;MGC-803
PANC-1(人胰腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD1D & B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
酶活性分析試劑盒CAT
EFNB2 Others Canine 狗 Ephrin-B2 / EFNB2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人胎盤絨膜癌細(xì)胞;BeWo
HCC-9724細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 小鼠肥大細(xì)胞癌細(xì)胞,P815細(xì)胞 牛腎細(xì)胞;MDBK
MDCK(犬腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-23010 Fibroblast Growth Medium , 成纖維細(xì)胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml
TIGIT Others Mouse 小鼠 TIGIT / VSTM3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人神經(jīng)束膜細(xì)胞cDNAHPC cDNA
人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
ZA6細(xì)胞,轉(zhuǎn)S9基因倉鼠卵巢細(xì)胞 WI-38(人二倍體胚肺細(xì)胞) 中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1
EFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A2 / EFNA2 蛋白 (His 標(biāo)簽)
BC-009(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte
大鼠趨化因子(FK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP antibody)免疫試劑盒 Human myelin basic protein antibody,MBP antibody ELISA Kit
土壤堿性蛋白酶 可見分光光度法 50管/24樣
RattrypsinELISA試劑盒大鼠*(trypsin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLipoxinA4,LXA4ELISA試劑盒人脂氧素A4(LXA4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanosteonectin,ONELISAKit人骨粘連蛋白(ON)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human insulin receptor beta (ISR- beta) ELISA Kit 人胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒
HumanlisteriolysinELISAKit 人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanglycophosphatidylinositol,GPIELISA試劑盒人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織蛋白巰基/結(jié)合巰基含量熒光定量檢測(cè)試劑盒20次
humanmixedlineagekinasedomain-like,MLKLELISAKit人混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域(MLKL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Tween20/TBS溶液(20×TBST,pH7.5)500ml實(shí)驗(yàn)方法上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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