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更新時間:2017-07-10 09:38:40瀏覽次數(shù):246次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)ELISA包被緩沖液(10×)500ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
ELISA包被緩沖液(10×)500ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
CCL1 Protein Human 重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白
人臍帶單核細胞*培養(yǎng)基 100mL
IL13 Others Mouse 小鼠 IL13 / ALRH 人細胞裂解液 (陽性對照)
7WCY1.0細胞,人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細胞株 非01群霍亂弧菌 豹貓肺成纖維樣細胞;LCL4
KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞瘤瘤株;G422
NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞) 5×106cells/瓶×2 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-H095人骨骼肌細胞*培養(yǎng)基100mL
EGFL6 Others Human 人 EGFL6 / EGF-L6 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人肺微血管內(nèi)皮細胞-HPMEC-a
非洲綠猴腎細胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4- 畸胎瘤細胞,F9細胞 BEL-7404(肝癌細胞)
人癌細胞;MDA-MB-435S
TNFRSF21 Others Mouse 小鼠 DR6 / TNFRSF21 人細胞裂解液 (陽性對照)
LCN2 Others Rat 大鼠 LCN2 / NGAL 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人少突膠質(zhì)前體細胞(懸浮生長)cDNAHOPC-os cDNA
KM小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤瘤株;LⅡ
TE-1細胞,食管癌細胞 人食管癌細胞,EC97076細胞 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-C
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-C2
HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠肝素(HS)ELISA試劑盒 ,英文名: HS ELISA Kit
人*(FK506)ELISA檢測試劑盒HumanTacrolimus-FK506ELISAKit 96T/48T
大鼠一氧化氮合成酶(NOS)免疫試劑盒 Rat nitric oxide synthase,NOS ELISA Kit
英文名稱TIMP-1金屬蛋白酶組織抑制因子-1規(guī)格:96T/48T
副傷*A(SalmonellaParatyphiA)標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒2次
ELISAKitMK人中期因子規(guī)格:48T/96T
兔*(cAMP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human chlamydial protease like activity factor (CPAF) ELISA Kit 人衣原體蛋白酶樣活性因子(CPAF)ELISA試劑盒
HumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit 人空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
humanglutamicaciddecarboxylaseautoantibody,GAD-AbELISA試劑盒人*脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織單胺氧化酶A型(MAO-A)活性比色法定量檢測試劑盒20次
HumanMucin-5subtypeAC,MUC5ACELISAKit人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
ELISA包被緩沖液(10×)500ml實驗方法雞肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
雞*(cAMP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
雞鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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