昆蟲(chóng)核蛋白/胞漿蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
昆蟲(chóng)核蛋白/胞漿蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
昆蟲(chóng)核蛋白/胞漿蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

人臍帶單核細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

SDC1 Others Rat 大鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

143TK細(xì)胞，人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系 鼠傷*Ta100 大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1

人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株;7WCY1.0

MG-63(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CD320 / 8D6A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0910

ENPP7 Others Mouse 小鼠 ENPP7 / NPP-7 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

MV3 人黑色素瘤細(xì)胞

MG-63人骨肉瘤細(xì)胞 Human osteosarcoma cell line MG-63 MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%優(yōu)質(zhì)熱滅活FBS

DKK1 Protein Rhesus 重組恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, Fc 標(biāo)簽)

人胚肺成纖維細(xì)胞;HFL1 人淋巴成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
LIF Others Mouse 小鼠 LIF 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人導(dǎo)管癌細(xì)胞;HCC38

COLO 205 人結(jié)腸癌細(xì)胞

U-2 OS-EGFP+puro人骨肉瘤細(xì)胞 U-2 human osteosarcoma cell line OS-EGFP+puro McCoy's 5A+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin

CD40LG Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞 (HREC)( 5×105 ) HBE, 正常人支氣管上皮細(xì)胞系 Human
小鼠脫氫酶(XDH)ELISA試劑盒 ，英文名： XDH ELISA Kit

人肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶(PPI)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanPeptidylprolylcis/transisomerase,PPIELISAKit 96T/48T

大鼠*(PG)免疫試劑盒 Rat Pepsin,PG ELISA Kit

英文名稱(chēng)RatCyclinD2ELISAKit大鼠細(xì)胞周期素D2(CyclinD2)規(guī)格：96T/48T

核酸氧化8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)高效液相色譜(HPLC)分析試劑盒20次

ELISAKitCH50人血清總補(bǔ)體規(guī)格：48T/96T
兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat insulin like growth factor binding protein 4 (IGFBP-4) ELISA Kit 大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒

HumanRotavirusantigen,RVAgELISAKit 人輪狀病毒抗原(RVAg)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISA試劑盒人*酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A脫氫酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

HumanMyeloidProgenitorInhibitoryFactor1，MPIF-1ELISAKit人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
昆蟲(chóng)核蛋白/胞漿蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法綿羊白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

綿羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

綿羊白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

綿羊白介素1(IL-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝