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更新時間:2017-07-06 09:06:22瀏覽次數(shù):396次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)血管通透性測試染色試劑盒100ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
血管通透性測試染色試劑盒100ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
HBZY-1(大鼠腎小球系膜細胞) 5×106cells/瓶×2
CM-H001人肺微血管內皮細胞*培養(yǎng)基100mL
NTRK1 Others Canine 狗 TrkA / NTRK1 人細胞裂解液 (陽性對照)
SW620細胞,人結腸癌細胞 人黑色素瘤細胞,HSC1細胞 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0905
人胚胎,皮膚,肌肉;M-7
ASGR1 Others Mouse 小鼠 ASGPR1 / ASGR1 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠紅白血病細胞;MEL
IGSF11 Others Human 人 IGSF11 / BTIGSF 人細胞裂解液 (陽性對照)
MDA-MB-231 人癌細胞
SK-BR-3人腺癌細胞 SK-BR-3 human breast adenocarcinoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS
MIF Protein Mouse 重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白
人胚胎氣管組織來源細胞;CCC-HBE-2 人肺泡上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
TGFBR2 Others Cynomolgus 食蟹猴 TGFBR2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人成纖維細胞;HFF
F344大鼠骨髓間質干細胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells
NW38細胞,人黑色素瘤細胞 鼠李糖乳桿菌 人神經(jīng)膠質細胞瘤細胞;U251
ANGPT2 Protein Mouse 重組小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白 (His 標簽)
JEG-3(人絨毛膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫試劑盒 Human VCAM-1 ELISA kit
人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒 ,英文名: PM-Scl/PM-1 ELISA Kit
RatInterleukin3,IL-3ELISA試劑盒大鼠白介素3(IL-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humanglutamicaciddecarboxylaseautoantibody,GAD-AbELISA試劑盒人*脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInvolucrin,iNVELISAKit人套膜蛋白(iNV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠毒性休克綜合征毒素1(TSST-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human acid phosphatase (ACP) ELISA Kit 人酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒
Humanplaetfactor3,PF3ELISAKit 人*原片段F1+2(F1+2)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanarabinogalactanproteins,AGPsELISA試劑盒人阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物游離氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒20次
humanthyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
血管通透性測試染色試劑盒100ml使用說明書兔主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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