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更新時間:2017-07-06 09:04:36瀏覽次數(shù):262次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)普魯士藍染色試劑盒(Perls stain,伊紅法)100ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
普魯士藍染色試劑盒(Perls stain,伊紅法)100ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
GNM(人口腔鱗癌頸淋巴結轉(zhuǎn)移癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CM-H034人腸動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL
CD300LG Others Rat 大鼠 CLM-9 / TREM4 / CD300LG 人細胞裂解液 (陽性對照)
HCT-8細胞,人結腸腺癌細胞 人黑色素瘤細胞,HME4細胞 SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細胞;293T
Sars結構蛋白表達株;293 001B
CD274 Others Mouse 小鼠 B7-H1 / CD274 / PD-L1 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-H097人椎間盤髓核細胞*培養(yǎng)基100mL
IL10RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL10RA 人細胞裂解液 (陽性對照)
人肺動脈平滑肌細胞HPASMC
RWPE2細胞,人前列腺上皮細胞 兔晶體上皮細胞永生系,N/N1003A(RLE)細胞 小鼠心肌細胞MCM
LLC-WRC 256(大鼠腹水癌細胞) 5×106cells/瓶×2
ACHN(人腎癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R043大鼠小腸平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL 人胚肺二倍體細胞;HEL-1
ATF2 Others Human 人 ATF2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人膀胱基質(zhì)成纖維細胞總RNAHBdSF tRNA
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO Hu 164 SCF 17
QGY-7703細胞,肝癌細胞 表皮癌細胞系,A431細胞 小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤;M5076
小鼠樹突狀細胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達);DG6-VAP33-GFP
CD38 Others Mouse 小鼠 CD38 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠結締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒 ,英文名: CTGF ELISA Kit
人血管生成素2(ANG-2)ELISA檢測試劑盒HumanAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit 96T/48T
水泡病毒(SVDV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforNE(Rabbitneutrophilelastase)ELISAKit兔子中性粒細胞彈性蛋白酶規(guī)格:48T/96T
體液HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性檢測試劑盒20次
ELISAKitNAG人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶規(guī)格:48T/96T
小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat endothelial lipase (EL) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
Humanhemoglobin-advancedglycosylationendproducts,Hb-AGEELISAKit 人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物(Hb-AGE)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanAquaporin0,AQP-0ELISA試劑盒人水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次
Humantissueinhibitorofmetalprotease1,TIMP-1ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
普魯士藍染色試劑盒(Perls stain,伊紅法)100ml實驗方法兔子補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔子補體蛋白4(C4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔子表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔子白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
我司普魯士藍染色試劑盒(Perls stain,伊紅法)100ml實驗方法本著標準*、質(zhì)量*、服務*、信譽*的宗旨,為客戶提供輕松便捷,安全可靠的網(wǎng)上采購模式!我們將竭誠為您服務,咨詢!
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