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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡檢測(cè)>> 線粒體綠色熒光染色試劑盒BBcellProbe M17100T實(shí)驗(yàn)方法
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更新時(shí)間:2017-07-06 08:43:55瀏覽次數(shù):145次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
Caspase 4抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
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線粒體綠色熒光染色試劑盒BBcellProbe M17100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
線粒體綠色熒光染色試劑盒BBcellProbe M17100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(7)PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
AR42J(大鼠胰腺外分泌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0141LLC-MK2(恒河猴腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
IL13RA2 Others Canine 狗 IL13RA2 / IL13R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
B16-F1細(xì)胞,鼠黑色素瘤細(xì)胞系 血細(xì)胞瘤細(xì)胞系,Ramos細(xì)胞 倉(cāng)鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞;145-2C11
綿羊皮膚細(xì)胞;OAR-S1
CXADR Others Human 人 CXADR / CAR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]
IL1R2 Others Mouse 小鼠 IL1R2 / CD121b 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
RH-35細(xì)胞,大鼠肝癌細(xì)胞 HeLa(細(xì)胞) EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1036
CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽)
SK-MES-1(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
EFNB1 Others Rat 大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
皮膚肥大細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
大鼠腎管狀上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
Y3-Ag 1.2.3大鼠骨髓瘤細(xì)胞 Myeloma cells in Y3-Ag 1.2.3 rats DMEM培養(yǎng)基+10%FBS
IGFBP3 Protein Human 重組人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 (His 標(biāo)簽)
hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 產(chǎn)氣腸桿菌
小鼠α2-巨球蛋白(α2M)ELISA試劑盒 ,英文名: α2M ELISA Kit
人血纖蛋白原(Fbg)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanFibrinogen,FbgELISAKit 96T/48T
大鼠激動(dòng)異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB(CKMB)免疫試劑盒 Rat cytokinin MB,CKMB ELISA Kit
英文名稱RatCD40LELISAKit大鼠CD40L規(guī)格:96T/48T
可溶性真菌/酵母細(xì)胞膜蛋白(粗提)制備試劑盒20次
ELISAKitTetanusAb人破傷風(fēng)抗體規(guī)格:48T/96T
小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat follistatin (FS) ELISA Kit 大鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒
humanthyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit 人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humananti-nucleolusantibody,ANAELISA試劑盒人抗核仁抗體(ANA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物糖類總量鐵比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
humanUDP-glucoseceramideglucosyltransferaseELISAKit人尿苷二磷酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
線粒體綠色熒光染色試劑盒BBcellProbe M17100T實(shí)驗(yàn)方法小鼠雌激素(E)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠雌二醇(E2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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