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更新時間:2017-07-06 08:43:06瀏覽次數(shù):147次
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Caspase 9 活性檢測試劑盒-熒光50T售后服務實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
Caspase 9 活性檢測試劑盒-熒光50T售后服務注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
AGS(人胃腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0165NCI-H1299(人非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2
SPN Others Rat 大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 人細胞裂解液 (陽性對照)
L129細胞,NCTC克隆929細胞 人Burkitt`s淋巴瘤細胞,Raji細胞 小鼠小膠質(zhì)細胞;BV2
小香豬皮膚細胞;SSC-S2
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
羊源細胞
IL1RAPL1 Others Mouse 小鼠 IL-1R8 / IL1RAPL1 人細胞裂解液 (陽性對照)
*(含10mL酶解緩沖液) 1mL
BEL-7404人肝癌細胞 BEL-7404 human hepatocarcinoma cells 1640+10% FBS
IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白
人肺動脈內(nèi)皮細胞(HPAEC) ( 5×105 ) rCSC, 大鼠心肌細胞 Rattus
MSR1 Others Rat 大鼠 MSR1 / SCARA1 人細胞裂解液 (陽性對照)
牛陀螺狀細胞;BT
腎實質(zhì)細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
3T6swiss細胞,小鼠胚胎成纖維細胞 人癌細胞,M453細胞 *過氧化物酶分析試劑盒GPX
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞;COS-1
IL13RA2 Others Human 人 IL13RA2 / IL13R 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠腭/肺/鼻上皮癌關聯(lián)蛋白(PLUNC)ELISA試劑盒 ,英文名: PLUNC ELISA Kit
人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)ELISA檢測試劑盒HumanfibrinopeptideA,FPAELISAKit 96T/48T
大鼠前列腺素E2合成酶(PGES)免疫試劑盒 Rat prostaglandin E2 synthase,PGES ELISA Kit
英文名稱RatSPE(IgG,M)ELISAKit大鼠抗抗體(SPE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
膠原蛋白酶消化試劑盒20毫升
ELISAKitVD2人維生素D2規(guī)格:48T/96T
小鼠黑色素細胞抗體(MC Ab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat thioredoxin reductase (TrxR) ELISA Kit 大鼠硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒
humanglutamicaciddecarboxylaseautoantibody,GAD-AbELISAKit 人*脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humananti-neutrophilgranulesantibody,ANGAELISA試劑盒人抗中性粒細胞顆??贵w(ANGA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物乳酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次
HumanUltraSensitiveProstateSpecificAntigen,PSAUSELISAKit人超敏前列腺特異性抗原(PSA-US)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Caspase 9 活性檢測試劑盒-熒光50T售后服務小鼠單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠單胺氧化酶A(MAOA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠大內(nèi)皮素(BigET)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠催乳素(PRL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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