我司Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒-熒光100T使用說(shuō)明書(shū)本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨，為客戶(hù)提供輕松便捷，安全可靠的網(wǎng)上采購(gòu)模式！我們將竭誠(chéng)為您服務(wù),咨詢(xún)！
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒-熒光100T使用說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推；對(duì)于細(xì)胞懸液每50～100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬(wàn)細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒-熒光100T使用說(shuō)明書(shū)注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測(cè)；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過(guò)皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
（7）PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
AAV-293(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

CL-0189Raji(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

ACVR2B Others Cynomolgus 食蟹猴 ACVR2B / ACTRIIB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

Jurknt. Clone E6-1細(xì)胞，白血病細(xì)胞 急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞,TALL-104細(xì)胞 人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞;CFPAC-1

婆羅門(mén)牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-3

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
*中和液TNS

IL1RL1 Others Mouse 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞;U251

大鼠源細(xì)胞 Burkitt's 淋巴瘤細(xì)胞，NAMALWA細(xì)胞 LLC-MK2細(xì)胞，綠猴恒河猴腎細(xì)胞

Hela, 人細(xì)胞系 Human

ADIPOQ Others Mouse 小鼠 ADIPOQ / ACDC / Adiponectin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CD70 Others Rat 大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

牛腎細(xì)胞;MDBK(BVDV-free)

人肺成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

OCM-1細(xì)胞，人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞 繩狀青霉 小鼠T淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞;Cyc-Tag(S49)

ANGPTL5 Protein Human 重組人 ANGPTL5 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

Li-7(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SARS冠狀病毒 Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
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