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更新時間:2017-07-05 12:28:11瀏覽次數(shù):150次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)Actinomycin D 50ul免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
Actinomycin D 50ul免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
A172(人腦膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0245Y1(Y-1) (小鼠腎上腺皮質細胞)5×106cells/瓶×2
FAS Others Cynomolgus 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細胞裂解液 (陽性對照)
Bowes Melanoma細胞,黑色素瘤細胞 人原髓細胞白血病細胞,AL7P/HL-60R細胞 人結直腸腺癌細胞;HT-29
非洲綠猴腎細胞;VERO
IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 1-77) 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-R005大鼠氣管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
IL22RA1 Others Canine 狗 IL22RA1 / IL22R 人細胞裂解液 (陽性對照)
人主動脈成纖維細胞HAF
3T3-L1細胞,小鼠脂肪細胞 人癌細胞,MCF-7(NEW)細胞 大鼠星形膠質細胞RA
新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞;NBTF
CSF1R Others Human 人 M-CSFR 人細胞裂解液 (陽性對照)
VSIG8 Others Human 人 VSIG8 人細胞裂解液 (陽性對照)
尿道上皮細胞培養(yǎng)基UCM
人胚肺二倍體細胞;HEL-2
大鼠骨髓瘤細胞;IR983F 結腸腺癌細胞,Caco-2細胞 WEHI 164細胞,鼠纖維肉瘤細胞系
GBC-SD, 人膽囊癌細胞 Human
CD99L2 Others Mouse 小鼠 CD99L2 / MIC2L1 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠X-射線修復交叉互補蛋白5(XRCC5)ELISA試劑盒 ,英文名: XRCC5 ELISA Kit
人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA檢測試劑盒HumanplaetmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit 96T/48T
大鼠基質金屬蛋白酶7(MMP-7)免疫試劑盒 Rat matrix metalloproteinase 7,MMP-7 ELISA kit
英文名稱RatCCL26ELISAKit大鼠CCL26規(guī)格:96T/48T
口香糖*比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitSRF/IF人皮膚反應因子/炎性因子規(guī)格:48T/96T
小鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human neural cell adhesion molecule ligand 1 (NCAM-L1/CD171) ELISA Kit 人神經(jīng)細胞粘附分子配體1(NCAM-L1/CD171)ELISA試劑盒
humanfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit 人促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanantimousantibody,HAMAELISA人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物葡萄糖磷酸變位酶(phosphoglucomutase;PGM)電泳分析試劑盒5次
Humanurokinaseplasminogenactivator,uPAELISAKit人*型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Actinomycin D 50ul免費代測小鼠肝細胞生長因子受體(HGFR/c-MET)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠肝表達趨化因子(LEC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠甘油三酯(TG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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