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更新時間:2017-07-05 12:27:08瀏覽次數(shù):1365次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)線粒體膜電位檢測試劑盒(TMRE法)100T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
線粒體膜電位檢測試劑盒(TMRE法)100T實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
線粒體膜電位檢測試劑盒(TMRE法)100T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
769-P(人腎細胞腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0270CRT(人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞)5×106cells/瓶×2
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
KB-C1.5細胞,細胞 人T淋巴瘤轉(zhuǎn)基因細胞,Jurkat D,E細胞 人喉癌上皮細胞;Hep-2
興國鯉尾鰭細胞;XGL
ACVRL1 Others Rat 大鼠 ALK-1 / ACVRL1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人腦微血管內(nèi)皮細胞cDNAHBMEC cDNA
IL23 Others Human 人 IL-23A & IL-12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照)
B95-8 絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細胞
CL-0190RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2
CSC, 小鼠心肌細胞
人胚腎細胞;293FT 人腎動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
腦微血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
小鼠黑色素瘤細胞;B16
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 Cdna-TGF-β1 Dinding Protein cDNA 肝癌細胞,Hepa 1-6細胞 M145細胞,猴腎C細胞
人胚肺二倍體細胞;KMB-17
JAM3 Others Mouse 小鼠 JAM3 / JAM-C 人細胞裂解液 (陽性對照)
鵝過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPARγ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)免疫試劑盒 Human GP-Ⅳ ELISA Kit
人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原(RANA)ELISA試劑盒 ,英文名: RANA ELISA Kit
RatImmunoglobulinE,IgEELISA試劑盒大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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Humaninsulin-likegrowthfactorsbindingprotein4,IGFBP-4ELISAKit人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Neuropeptide Y (NP-Y) ELISA Kit 人神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒
HumancyclophilinB,CyPBELISAKit 人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
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Humanurokinase-typeplasminogenactivator,uPA/PLAUELISAKit人*型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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