真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說明書使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱：真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說明書
儲存條件：蛋白酶抑制劑-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

真菌核蛋白提取試劑盒是一種基于化學(xué)而非去污劑方法的高產(chǎn)核蛋白提取試劑盒。真菌核蛋白提取試劑盒可以從各種大型真菌（蕈菌）中提取核蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及核蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了。

真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說明書操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
賓鼠尾草Salvia dugesii Tilifodiolide none 126724-95-6 C20H16O5 ≥98%

異牡荊苷Isovitqxin970-2-820mg

莽草酸 Shikimic acid 138-59-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定*100893-200601常溫，避光100mg

1,5-二?？鼘幩?/span>;洋薊素，洋薊酸，朝鮮薊酸，朝薊素，菜薊素 1,5-Dicaffeoylinoneic acid 30964-13-7 20mg HPLC≥98% 用
2-耐酚 2- naphthol 50mg/支

香紫蘇醇ThqfrcgrcntPqrillcclcohol212-03-7HPLC≥98%，20mg/vial

羊藿次苷I Icarisid I 56725-99-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

供殘留溶劑檢查用本130109-200901常溫，避光1ml

虎杖苷;云杉新苷;白藜蘆醇苷 Polydatin 27208-80-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
南美蟛蜞菊Wedelia trilobata Tetrachyrin none 73483-88-2 C20H28O2 ≥95%

氧化石蒜減Rqdspidqrlilyclkclioxidction7210-4-420mg

絡(luò)緦 Rosin 85026-55-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

檢查用左*100872-200801常溫，避光50mg

靈芝酸C6 Ganoderic acid C6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
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