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轉(zhuǎn)膜液(Western),PVDF膜適用50ml實驗方法

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更新時間:2017-07-05 11:13:54瀏覽次數(shù):222次

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轉(zhuǎn)膜液(Western,PVDF膜適用50ml實驗方法儲存條件:室溫保存。

有效期:一年。

產(chǎn)品簡介:

Western轉(zhuǎn)膜液試劑用于Western時濕法電轉(zhuǎn)膜。本試劑不使用有毒的甲醇試劑以及其他有毒性組分,轉(zhuǎn)膜液安全無毒。加水后直接配制,無需調(diào)節(jié)PH值。轉(zhuǎn)膜液可以回收使用。

轉(zhuǎn)膜液(Western,PVDF膜適用50ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
轉(zhuǎn)膜液(Western,PVDF膜適用50ml實驗方法注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
蘿藦科牛奶菜屬植物* Marsdeniatenacissima(Roxb.)WightetArn. Tenacissoside I *苷I 191729-44-9 C44H62O14 98%

葉皇速Xcnthophyll17-40-20mg

羅漢果皂苷V;羅漢果皂苷V;羅漢果甜苷V Mogroside 88901-36-4 20mg HPLC98% 用于含量測定

對照品地*130516-200401含量測定

新苦參醇 Neokurarinol 20mg HPLC98% 用于含量測定
27631-29-4 多沙唑嗪相關(guān)雜質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品 20mg

割舌樹Walsura robusta 南美楝屬二醇 67253-01-4 C30H52O3 99% 流柳;鄰乙流基本酸鈉(Y0000109

2,4-TDI Derivat 癸二酸二丁酯標(biāo)準(zhǔn) 已二酸二異丁酯標(biāo)

*雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品103577-40-8 ea*雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品

斯皮諾素 72063-39-9 HPLC98%;20mg 訂購|咨詢
18559-94-9 *標(biāo)準(zhǔn)品 200mg

野馬追內(nèi)酯BEupatoriumlindleyanumlactonepHPLC98%;20mg/

O-Demetxylforbexanthone 7,9,12-三輕基-2,2-二甲基-2H,6H-[3,2-B]氧雜意-6- 92609-77-3

烯蟲酯 標(biāo)準(zhǔn)品 號:40596-69-8 100mg

(無水)葡萄糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 50-99-7 1g 訂購|咨詢
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Humanoctamertranscriptionfactor2B,OTF2BELISAKit人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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