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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測(cè)>> 植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)100T免費(fèi)代測(cè)
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更新時(shí)間:2017-07-05 10:55:00瀏覽次數(shù):134次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)100T免費(fèi)代測(cè)儲(chǔ)存條件:蛋白酶抑制劑-20℃保存; 其它組分2-8℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能,扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套,因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會(huì)使膜蛋白喪失其天然結(jié)構(gòu),因而妨礙了膜蛋白的功能研究。
植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)100T免費(fèi)代測(cè)實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)100T免費(fèi)代測(cè)注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(7)PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
蔓荊Vitex trifolia 7,8,9,9-Tetradexy7noisolariciresinol none 357645-16-0 C20H20O6 ≥95%
歐前胡速ImpqrctorinHPLC≥98%,20mg/支
3-輕基巴戟醌 3-xy7noxy-morindone 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
對(duì)照品*130493-200102含量測(cè)定
太子參環(huán)肽B Heterophyllin B 145459-19-4 20mg HPLC≥98% 太子參環(huán)肽B 145459-19
25086-15-1 甲基丙烯酸共聚物C型標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
云南鼠尾草Salvia yunnanensis 2,24-二輕基熊果酸 143839-02-5 C30H48O5 ≥95% 爾可定 - 對(duì)照譜圖(P100000
Related Compound A相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品28910-89-630mg
Cefotetan*標(biāo)準(zhǔn)品69712-56-7500mg
西紅花苷 42553-65-1 Standard(標(biāo)準(zhǔn));20mg 訂購(gòu)|咨詢
輕臭吐根酚堿標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
胰島速Insulin約20mg
1-xy7noxy-2,3,5-trimetxoxyxanthone 22804-49-5
依法韋侖相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品440124-96-9cards
芥子堿硫清酸鹽 7431-77-8 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢
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我司植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)100T免費(fèi)代測(cè)本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨,為客戶提供輕松便捷,安全可靠的網(wǎng)上采購(gòu)模式!我們將竭誠(chéng)為您服務(wù),咨詢!
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