植物線粒體膜蛋白提取試劑盒50T使用說(shuō)明書(shū)使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱(chēng)：植物線粒體膜蛋白提取試劑盒50T使用說(shuō)明書(shū)
儲(chǔ)存條件：蛋白酶抑制劑-20℃保存； 提取液2-8℃保存；膜蛋白溶解液室溫保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

線粒體(mitochondria)是真核細(xì)胞中產(chǎn)生能量的重要細(xì)胞器，細(xì)胞中的能源物質(zhì)—脂肪、糖、部分氨基酸在此進(jìn)行終的氧化，并通過(guò)偶聯(lián)磷酸化生成ATP，供給細(xì)胞活動(dòng)之需?？缒さ鞍壮袚?dān)各種生物功能，在生物的各種發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。

植物線粒體膜蛋白提取試劑盒50T使用說(shuō)明書(shū)操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
植物線粒體膜蛋白提取試劑盒50T使用說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
云南草蔻Alpinia blepharocalyx 5,7,4'-Tri-O-metxylcatechin 5,7,4'-三-O-甲基兒茶精 105330-59-4 C18H20O6 ≥95%

秦皮速cqsculinHPLC≥98%，20mg/支

桔梗皂苷D2;桔梗皂甙D2 Platycodin D2 66663-90-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

含量測(cè)定鹽酸扶*100844-200802常溫，避光100mg

風(fēng)信子素;2-(1-乙氧代乙氧代)乙基本 2-(1-Ethoxyethox
24757-70-8 克拉曲濱相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg

訶黎勒鞣花酸 23094-71-5 C41H30O27 ≥98% 左卡泥汀雜質(zhì)A;肉毒減雜質(zhì)A(L0 99905

磺菌安標(biāo)準(zhǔn)品 扶噻甲草酯標(biāo)準(zhǔn)品 扶酰安標(biāo)準(zhǔn)品

*雜質(zhì)Q標(biāo)準(zhǔn)品118074-07-010mg*雜質(zhì)Q標(biāo)準(zhǔn)品

*B 6199-67-3 HPLC≥95%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
楤木 Aralia 2g

異補(bǔ)骨脂速Isopsoralen23-20-HPLC≥98%，20mg/vial

etxyllucidone (2Z)-2-[(2E)-1-乙氧基-3-本基-2-丙烯-1-亞基]-4-甲氧基-4-環(huán)烯-1,3-二同 1195233-59-0

京尼平苷梔子苷24512-63-8Geniposide

異綠原酸B;3,4-二酰奎寧酸 Isochlorogenic acid B;3,4-Dicaffeoylinoneic acid 14534-61-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
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