細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T免費(fèi)代測(cè)使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱：細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T免費(fèi)代測(cè)
儲(chǔ)存條件：蛋白酶抑制劑-20℃保存； 其它組分2-8℃保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會(huì)使膜蛋白喪失其天然結(jié)構(gòu)，因而妨礙了膜蛋白的功能研究。

細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T免費(fèi)代測(cè)操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T免費(fèi)代測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
冬凌草Isodon eriocalyx 2α,3α,23-Trixy7noxyolean-12-en-28-oic acid 2,3,23-三羥基-12-齊墩果烯-28-酸 102519-34-6 C30H48O5 ≥95%

甘草苷LiquiritinHPLC≥98%，20mg/支

甲基麥冬二輕高異黃同A;甲基麥冬黃烷同A metxylophiopogonanone A 74805-92-8 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

對(duì)照品*130461-200501含量測(cè)定

柯伊利素-7-O-葡萄
23964-57-0 *標(biāo)準(zhǔn)品 125mg

蒿醚HaoJiami71963-77-4HPLC≥98%,20mg/支

Ginsenoyne K (3R,10S,8E)-10-輕過(guò)氧-1,8-十七碳二烯-4,6-二炔-3-醇 141947-42-4

Primidone *標(biāo)準(zhǔn)品125-33-7 200mg*標(biāo)準(zhǔn)品

馬鞭草苷 548-37-8 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢
國(guó)槐Sophora japonica Vestitol 維斯體素 35878-41-2 C16H16O4 ≥98.5%

異鉤藤減Isorhynchophyllinq6829-1-420mg

人參皂苷F2;人參皂甙F2 Ginsenoside F2 62025-49-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

對(duì)照品胱安酸140632-200502檢查

蝙蝠葛堿;北豆根堿;山豆根堿 Dauricine 524-17-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
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