大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件： 蛋白酶抑制劑-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會(huì)使膜蛋白喪失其天然結(jié)構(gòu)，因而妨礙了膜蛋白的功能研究。大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒是一種基于化學(xué)方法的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。

 大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒可以從各種大腸桿菌菌體中提取膜蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。

大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對(duì)于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測(cè)；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
（7）PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
香櫞Citrus medica 2',4',6'-Trimetxoxyacetopxenone 2,4,6-*氧基本以酮 832-58-6 C11H14O4 ≥95%

大皇醋Rhqin20mg/支

甲基* metxyl hesperidin 11013-97-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

含量測(cè)定*100828-200501常溫，避光100mg

燈盞花乙素甲酯 Scularin metxylester 119262-68-9 20mg HPLC≥98% 燈盞花乙素甲酯 1
2387-23-7 *相關(guān)化合物C標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 25mg

分葉小檗Berberis pruinosa 3,4-二輕基肉桂酰安 1202-41-1 C9H9NO3 ≥95% 番瀉甙A191555

*相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品15mg

Cephapirin wo7ium頭孢匹林鈉標(biāo)準(zhǔn)品24356-60-3500mg

羥基積雪草苷 34540-22-2 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
豆科(Legumin0sae) 植物合歡的干燥樹皮 (-)-Syringaresnol-4-O-beta-D-apiofuranosyl -(1→2)-beta-D-glucopyranoside (-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷 136997-64-3 C33H44O17 ≥98%

異葒草苷Isooriqntin20mg/支

貝母素乙;貝母乙素 Peiminine 18059-10-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

含量測(cè)定* 100660-200401常溫，避光100mg

長(zhǎng)春瑞賓相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品25mg
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