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更新時間:2017-07-04 14:37:44瀏覽次數(shù):132次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)非變性蛋白裂解抽提液100ml使用說明書儲存條件:2-8℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
非變性蛋白裂解液是一種在非變性條件下裂解細胞和組織的裂解液。能裂解細胞并充分釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。裂解蛋白產(chǎn)物大限度地保留了蛋白的特性和功能。本裂解液裂解的細胞和組織樣本,主要用于Western,免疫沉淀和免疫共沉淀等。
非變性蛋白裂解抽提液100ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
非變性蛋白裂解抽提液100ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
大豆 Glycinemax(L.)merr Soyasaponin Bb 大豆皂苷Bb 51330-27-9 C48H78O18 ≥98%
蛇床子速Ostholq20mg/支
瓜子金皂苷V Polygalasaponin V 162857-65-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
含量測定*100769-200401常溫,避光50mg
Lumefantrine *標準品82186-77-4 100mg
20(S)-原人參二醇 30636-90-9 檢測用對照品 (S型)原人參二醇
三茱萸Cornus officinalis 7-O-metxyl morroniside 7-O-甲基漠諾苷 C18H28O11 當歸酸
對照品槲皮苷111538-200403含量測定
nitnilotriacetic Acid 安基三乙酸標準品139-13-9 50mg安基三乙酸標準品
本品為唇形科植物冬凌草 Rabdosiarubescens(Hamst.)C.Y.WuetHsuan Glaucocalyxin A 藍萼甲
78964-85-9 *安基丁三醇標準品(N/A) 800mg
益母草Leonurus japonicus none 83529-71-9 C39H32O14 ≥95% * 雜質(zhì)A(T120010
1β-xy7noxytorilin 509078-16-4
Oxycodone xy7nochloride CII鹽酸*標準品124-90-3 1g
異香蘭酸 645-08-9 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
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