RIPA裂解液（蛋白裂解液）50ml免費(fèi)代測(cè)使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱：RIPA裂解液（蛋白裂解液）50ml免費(fèi)代測(cè)
儲(chǔ)存條件：裂解液室溫保存；抑制劑-20℃保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

RIPA裂解液采用優(yōu)質(zhì)原料配制，對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用，是經(jīng)典常用的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等下游實(shí)驗(yàn)。RIPA裂解液中已含常用磷酸酶抑制劑。

RIPA裂解液（蛋白裂解液）50ml免費(fèi)代測(cè)操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
RIPA裂解液（蛋白裂解液）50ml免費(fèi)代測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
半枝蓮 Portulaca grandiflora Hook Scutebarbatine A 半枝蓮堿 176520-13-1 C32H34N2O7 ≥98%

擬人參皂苷RT5PsquoginsqnosidqRT5HPLC≥98%;20mg/支

新*內(nèi)酯;*丙素，新*素，*新苷 Neoandrographolide 5508-58-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

含量測(cè)定*100704-200501常溫，避光100mg

Testosterone Propionate
17-羥基 sprengerin... xy7noxy Sprengerinin C, 17 (HPLC,≥98%) 1029017-75-1 10MG 標(biāo)準(zhǔn)品

腺花香茶菜Isodon adenantha 十輕-7,7,9a-*基-4-亞甲基-6H-環(huán)氧并[5,6]環(huán)壬烷并[1,2-b]呋喃-6-同 102227-61-2 C15H22O3 ≥98% 迷迭香酸18 705

對(duì)照品典化鉀100194-200502含量測(cè)定

Testolactone CIII睪內(nèi)酯酮標(biāo)準(zhǔn)品968-93-4 125mg睪內(nèi)酯酮
219921-94-5 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg

蛹蟲草 Cordycepsmilitaris 蟲草素 73-03-0 C10H13N5O3 ≥98% 言酸甲扶喹(M025 000

百草枯二錄鹽(P 百科(聯(lián)本三坐醇 百菌清標(biāo)準(zhǔn)品

西酞普蘭相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品55011-89-7200mg

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