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蛋白酶抑制劑混合物(含EDTA)250ul實驗方法

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更新時間:2017-07-04 14:24:33瀏覽次數(shù):300次

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蛋白酶抑制劑混合物(含EDTA250ul實驗方法注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
蛋白酶抑制劑混合物(含EDTA250ul實驗方法儲存條件:-20℃保存。

有效期:一年。

產(chǎn)品簡介:

本蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括*蛋白酶、半*酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶、金屬蛋白酶等。

此抑制劑混合物為100 倍濃縮DMSO 溶液,適用于從哺乳動物細胞、組織中提取蛋白,直接加入任何組織類型和細胞的裂解產(chǎn)物中,均能有效抑制蛋白酶的活性,更高效的提取目的蛋白。

蛋白酶抑制劑混合物(含EDTA250ul實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
1)取 1060 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
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