當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> 蛋白酶抑制劑混合物250ul使用說明書
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更新時間:2017-07-04 14:23:51瀏覽次數(shù):105次
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蛋白酶抑制劑混合物250ul使用說明書儲存條件:-20℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
本蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括*蛋白酶、半*酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
此抑制劑混合物為100 倍濃縮DMSO 溶液,適用于從哺乳動物細(xì)胞、組織中提取蛋白,直接加入任何組織類型和細(xì)胞的裂解產(chǎn)物中,均能有效抑制蛋白酶的活性,更高效的提取目的蛋白。適用于Western Blot 和免疫共沉淀等。
蛋白酶抑制劑混合物250ul使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
蛋白酶抑制劑混合物250ul使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
花椒Zanthoxylum bungeanum Savinin 檜脂素,灑* 493-95-8 C20H16O6 ≥95%
醋棗仁皂苷BJujubosidqB20mg/支
日蟾蜍他靈;和蟾蜍他 Gamabufotalin 465-11-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
HPLC法含量測定*100688-200401常溫,避光50mg
Menthol 薄荷醇標(biāo)準(zhǔn)品2216-51-5 250mg
1672-58-8 *雜質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 15mg
西紅花苷;藏紅花速;番紅花苷Crocetin;crocin;crocusglycosides4223-62-120mg/支;
Goniodiol 7-acetate GONIODIOL 7-ACETATE 96422-53-6
抗倒酯 標(biāo)準(zhǔn)品 號:95266-40-3 100MG
三七素 5302-45-4 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
川芎 Ligusticum chuanxiong Hort wo7ium ferulic * 24276-84-4 C10H9NaO4 ≥98%
柚皮速NcringqninHPLC≥98%,20mg/支
輔酶Q10 Coenzyme Q10 303-98-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
標(biāo)準(zhǔn)品乙酰吉它霉素130372-200301效價測定
β-Glucogallin Beta-葡糖倍苷純度:>95%
大鼠血管生長素(ANG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人細(xì)胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)抗體免疫試劑盒 Human anti-cytochrome P450c21/21-hydroxylase(CYP21B)antibody ELISA Kit
苯丙酸解酶(PAL)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
ratNoradrenaline,NAELISA試劑盒大鼠*(NA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanhiston-H2bELISA試劑盒人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanmacrophagestimulatingprotein,MSPELISAKit人巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1/CD54) ELISA Kit 大鼠細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒
HumanangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISAKit 人血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanComplement4,C4ELISA試劑盒人補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織BLK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
HumanPulmonarysurfatcant-associatedproteinB,SP-BELISAKit人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
蛋白酶抑制劑混合物250ul使用說明書人類白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人類白細(xì)胞抗原A(HLA-A)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人類白C抗原DR(HLA-DR)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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