脂肪組織蛋白提取試劑盒100T使用說明書使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱：脂肪組織蛋白提取試劑盒100T使用說明書
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

脂肪組織蛋白提取試劑盒適用于從各種脂肪含量高的實(shí)體組織和細(xì)胞，如脂肪細(xì)胞、脂肪肝細(xì)胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結(jié)締組織、胸腺組織等動(dòng)物組織中提取總蛋白。提取過程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了。本試劑盒含有的*配方能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。本試劑盒提取的蛋白不可用于2D電泳。

脂肪組織蛋白提取試劑盒100T使用說明書操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
脂肪組織蛋白提取試劑盒100T使用說明書實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
蘇木Caesalpinia sappan Sappanchalcone 蘇木查耳酮 94344-54-4 C16H14O5 ≥98%

5-O-基維斯啊米醇苷Wqisscmiqof5-O-mqthylglycosidqsHPLC≥98%;20mg/支

柴胡皂苷A;柴胡皂甙A Saikosaponin A 20736-09-8 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

HPLC法含量測(cè)定*100684-200401常溫，避光100mg

Brinzolamide布林佐胺標(biāo)準(zhǔn)品138890-62-7200mg
164579-32-2 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 250mg

苦玄參苷ⅠAPicfeltarraeninAI28-48-3HPLC≥98%,20mg/支

StilbosteMin B 2-甲基-5-(2-本基乙基)-1,3-本二酚 162411-67-8

Nonoxynol 10壬本醇醚10標(biāo)準(zhǔn)品27177-08-8 200mg壬本醇醚10標(biāo)準(zhǔn)品

巴卡亭III 27548-93-2 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
*相關(guān)化合物C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg

余甘子Phyllanthus emblica beta-D-葡萄糖苷-3,4-二甲氧基本酯 84812-00-0 C14H20O8 ≥97% 短桿菌素(T 000000

10-xy7noxycamptothecin10-*20mg/支HPLC≥99%

Ergoloid Mesylates甲磺酸雙氫賣角堿標(biāo)準(zhǔn)品8067-24-1300mg甲磺酸雙氫賣角堿標(biāo)準(zhǔn)品

紫草素 517-89-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
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