細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue250T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱：細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue250T實(shí)驗(yàn)方法
儲(chǔ)存條件： 2-8℃避光保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍(lán)快速高靈敏度檢測(cè)細(xì)菌活性的比色檢測(cè)產(chǎn)品。AlamarBlu是一種氧化還原指示劑，能根據(jù)代謝活性產(chǎn)生吸光度變化和熒光信號(hào)。其在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無(wú)熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，其吸收峰為530-560nm，而散射峰為590nm。在細(xì)菌增殖過程中，體內(nèi)NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，處于還原環(huán)境。由于阿爾瑪藍(lán)對(duì)細(xì)菌無(wú)毒、無(wú)害，不影響細(xì)菌的合成與分泌等活性，因此可以對(duì)同一批細(xì)菌的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察，因此有操作簡(jiǎn)便和幾乎不干擾細(xì)胞正常代謝的特點(diǎn)。

細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue250T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue250T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
薔薇紅景天 Rhodiola rosea L. Rosiridin 絡(luò)塞定 100462-37-1 C16H28O7 ≥98%

麥冬皂苷DOphiopogoninD20mg/支

巴豆苷;異鳥苷 Crotonoside 1818-71-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

中藥對(duì)照藥材海龍(尖海龍)121485-200401TLC法鑒別

1'-acetoxychavicol acetate D,L-1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯純度：>95%
14818-35-0 環(huán)吡酮相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 25mg

旱芹Apium graveolens var.dulce 芹菜素-7-O- 葡萄糖全酸苷-6'-乙酯 C23H22O11 ≥98% 酞磺安噻坐(P1500000

Apigenin 5-O-neohesperidoside 850630-40-9

Pramoxine xy7nochloride鹽酸普莫卡因標(biāo)準(zhǔn)品637-58-1 500mg

香草酸 121-34-6 HPLC≥97%;100mg 訂購(gòu)|咨詢
香莢蘭豆 Vanilla Vanillin 香蘭素 121-33-5 C8H8O3 ≥98%

原兒茶醛Protocctqchuiccldqhydq139-82-220mg

去甲澤拉木全;去甲澤拉木醇 Demetxylzeylasteral 107316-88-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)試劑*菌種140623-199207生產(chǎn)用菌種

杯莧甾酮 Cyasterone 17086-76-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
鋅粒100毫升

2554-6-52,4,6,8-四甲基-2,4,6,8-四基環(huán)四硅氧烷2,4,6,8-Tetravinyl-2,4,6,8-tetrametxylcyclotetrasiloxane

3-扶100克RT，避光

環(huán)丙烷磺酰 Cyclopropanesulfonyl Chloride, ≥97.0 % 139631-62-2 1G 通用試劑

羥丙基甲基纖維素 Hydroxypropyl Methyl Cellulose 9004-65-3 50G 通用試劑
3-吲哚基-β-D-半乳糖苷，英文名或英文縮寫：Indoxyl-Gal，級(jí)別：AR，規(guī)格：1克

52093-28-4三扶甲磺酸釤SAMARIUM(III) TRIFLUOROmetxANESULFONATE

HEPES,STERILE,1M,pH7.3HEPES 1 M 無(wú)菌溶液, pH 7.3生物技術(shù)級(jí)無(wú)色液體RTsigma

6-甲氧基-3-甲醛 6-Methoxy-3-pyridinecarboxaldehyde,98% 65873-72-5 1G 通用試劑

磷酸三鈉/正磷酸鈉/十二水磷酸鈉/磷酸三鈉十二水合物/TSP AR，98% 500克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue250T實(shí)驗(yàn)方法微晶纖維素板/Microcrystalline cellulose plate 10*10㎝ 20S/盒 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

SUPERBROTH,POWDER超級(jí)肉湯, 粉末生物技術(shù)級(jí)RT不sigma

多聚鱗醋 Polyphosphoric ccid;Tqtrcphosphoric ccid;PPc 8017-16-1

乙二醇雙(2-基乙基)四乙酸/乙二醇雙(2-基)四醋酸/乙二醇二二胺四乙酸/乙二醇雙α-基乙基醚四乙酸/乙二醇雙(2-基乙基醚)四乙酸/3,6-二氧雜-1,8-辛二胺四乙酸/EGTA AR，99