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更新時(shí)間:2017-07-03 14:20:08瀏覽次數(shù):118次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)細(xì)胞骨架染色試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法
產(chǎn)品名稱:細(xì)菌活性檢測試劑盒-AlamarBlue1000T免費(fèi)代測
儲(chǔ)存條件: 2-8℃避光保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
細(xì)菌活性檢測試劑盒是應(yīng)用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍(lán)快速高靈敏度檢測細(xì)菌活性的比色檢測產(chǎn)品。AlamarBlu是一種氧化還原指示劑,能根據(jù)代謝活性產(chǎn)生吸光度變化和熒光信號(hào)。其在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無熒光性,而在還原狀態(tài)下,轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物,其吸收峰為530-560nm,而散射峰為590nm。在細(xì)菌增殖過程中,體內(nèi)NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高,處于還原環(huán)境。由于阿爾瑪藍(lán)對(duì)細(xì)菌無毒、無害,不影響細(xì)菌的合成與分泌等活性,因此可以對(duì)同一批細(xì)菌的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察,因此有操作簡便和幾乎不干擾細(xì)胞正常代謝的特點(diǎn)。
細(xì)菌活性檢測試劑盒-AlamarBlue1000T免費(fèi)代測使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
細(xì)菌活性檢測試劑盒-AlamarBlue1000T免費(fèi)代測操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
細(xì)菌活性檢測試劑盒-AlamarBlue1000T免費(fèi)代測實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
薔薇紅景天 Rhodiola rosea L. Rosin 洛緦 85026-55-7 C15H20O6 ≥98%
巴西蘇木速Brczilhqmctoxylin10mg/支
花前胡甲素 Praeruptorin A 73069-25-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
含量測定*100650-200301常溫,避光100mg
純化葡萄籽低聚原花青素標(biāo)準(zhǔn)品500mg
148146-51-4 *相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 10mg
刺桐Erythrina arborescens 2,3-脫輕維同 74161-25-4 C20H18O6 ≥98.5% 華發(fā)林鈉(Y0000778
*相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品148146-51-420mg
Trimetxoprim *標(biāo)準(zhǔn)品738-70-5 300mg*標(biāo)準(zhǔn)品
人參皂苷Rd 52705-93-8 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
桐葉千金藤Stephania hernandifolia Periglaucine A none 1025023-04-4 C20H23NO6 ≥98%
原兒茶醛Protocctqchuiccldqhydq20mg/支
蔓荊Vitex trifolia Viteralone (S)-5,6,7,8-四輕-4,5-二甲基-8-氧代奈并[2,3-B]呋喃-3-甲全 87440-75-3 C15H14O3 (1R-(+-反式-蒎烷;松節(jié)烯16832-100
HPLC法含量測定*100456-200301常溫,避光50mg
多奈哌齊A標(biāo)準(zhǔn)品145546-80-125mg
鋅片,英文名或英文縮寫:Zinc,級(jí)別:BR,95%,規(guī)格:100克
97-88-1甲基丙烯酸正丁酯Butyl metxacrylate
辛二酸,英文名或英文縮寫:Sebacic acid,級(jí)別:BR,規(guī)格:1克
胞苷 Cytidine,≥99% 65-46-3 5G 通用試劑
二十二醋 99% Docoscnoic ccid 11-82-6
3-吲哚丁酸shēng huà shì jì容量:25克
N-琥珀酰-炳酰安-炳酰安-脯酰安-本炳安醋隊(duì)肖基酰本安(-20℃) SUC-cLc-cLc-PRO-PHq-PNc 70967-97-4
1,4-Dioxaspiro[4.5]decane-8-boronic acid pinacol ester 1106871-37-7
N,N'-二異丙基碳二... N,N'-Diisopropylcarbodiimide,≥98.0% 693-13-0 25ML 通用試劑
L-乳酸鉀/乳酸鉀/Potassium L-lactate AR,60% 250、1000毫升 國產(chǎn)/進(jìn)口
細(xì)菌活性檢測試劑盒-AlamarBlue1000T免費(fèi)代測微孔濾膜(混纖)/Millipore filter,水相使用 Φ13*0.22μ 200張/盒 國產(chǎn)/進(jìn)口
Gallicacid3,4,5-三羥基本酸25克BR
聚蛋柏胨 POLYPqPTONq
乙二醇雙(2-基乙基)四乙酸四鈉/乙二醇雙(2-基)四醋酸四鈉/乙二醇二二胺四乙酸四鈉/乙二醇雙α-基乙基醚四乙酸四鈉/乙二醇雙(2-基乙基醚)四乙酸四鈉/3,6-二氧雜-1,8-辛二胺四乙酸四鈉/EGTA tetrasodium AR,97% 10/50克 國產(chǎn)/進(jìn)口
二乙三胺五乙酸/二乙三胺五醋酸/三胺五乙酸
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