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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡檢測(cè)>> Caspase 10 活性檢測(cè)試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)
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更新時(shí)間:2017-07-03 13:59:45瀏覽次數(shù):170次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
Caspase 7抑制劑200ul使用說(shuō)明書(shū)
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我司Caspase 10 活性檢測(cè)試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨,為客戶提供輕松便捷,安全可靠的網(wǎng)上采購(gòu)模式!我們將竭誠(chéng)為您服務(wù),咨詢!
Caspase 10 活性檢測(cè)試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存條件:裂解緩沖液和檢測(cè)液室溫保存;其他-20℃避光保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
Caspase10活性檢測(cè)試劑盒(Caspase10ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中Caspase10酶活性或純化的Caspase10酶活性的試劑盒。Caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著非常重要的作用,其中Caspase-10是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類含有死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域(dead-effectordomain,DED)的蛋白酶,在結(jié)構(gòu)上與Caspase家族的另一成員Caspase-8有很高的同源性,通過(guò)形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合物(deathinducedsignalingcomplex,DISC),激活自身蛋白酶活性,傳遞凋亡信號(hào)。Caspase-10的功能異常與許多疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)系。
Caspase-10比色法檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單方便的方法檢測(cè)能識(shí)別AEVD序列的 caspases活性。本檢測(cè)技術(shù)基于酶切標(biāo)記了的底物AEVD -對(duì)硝基苯胺(pNA)之后對(duì)發(fā)光基團(tuán)pNA進(jìn)行光譜光量測(cè)量。pNA發(fā)射的光譜可以被分光光度計(jì)或者微量滴定板讀數(shù)器在400-405 nm出定量檢測(cè)。 本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測(cè)或容量不超過(guò)100μl的分光光度檢測(cè)杯檢測(cè),可用于培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織樣本的caspase-10檢測(cè)。
Caspase 10 活性檢測(cè)試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
Caspase 10 活性檢測(cè)試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(7)PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
紫花前胡Peucedani Decursivi Radix Nodakenin 紫花前胡苷 495-31-8 C20H24O9 ≥98%
紫草速Shikonin217-89-220mg
蘇木Caesalpinia sappan 7,3',4'-Trixy7noxy-3-benzyl-2H-chromene 7,3',4'-三輕基-3-芐基-2H-本并 1111897-60-9 C16H14O4 醋酸甲地孕同(100171
檢查用聯(lián)本100327-200201常溫,避光50mg
*相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品42019-78-3 25mg
1015-37-5 黃霉素標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 250mg
靈芝醋AGanodericacidA81907-6-20mg
PerforatuMone PERFORATUMONE 827319-50-6
,四溴菊酯 標(biāo)準(zhǔn)品 號(hào): 250MG
法卡林二醇;Faldiol 55297-87-5 20mg 訂購(gòu)|咨詢
丹酚酸D Salvianolic acid D 分 子 量:492.4400 編號(hào):142998-47-8 分子式:C20H18O10 別 名:丹參酚酸D 【基本用途】本品用于含量測(cè)定。
紫蘇 Limnophila aromatica (Lam.) Merr. L-Perillaldehyde 紫蘇全 18031-40-8 C10H14O 言酸地巴坐(100420
對(duì)照品20(S)-原人參二醇111747-200501含量測(cè)定
5-pxenylhydantoin5-本基海因標(biāo)準(zhǔn)品89-24-7 100mg5-本基海因標(biāo)準(zhǔn)品
苦木Picrasma quassioides Icariside E5 羊藿次甙E5 126176-79-2 C26H34O11 ≥95%
15-OxoEDE (100 ug) 15-oxo-11Z,13E-eicosadienoic acid; 15-KEDE; 15-OxoEDE
LEI-106 (10 mg)
Annexin V, 重組的 Annexin V, Recombinant
Lignoceroyl Ethanolamide (5 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-tetracos*; Lignoceroyl Ethanolamide
5,8,11-Eicosatriynoic Acid (10 mg) 5,8,11-eicosatriynoic acid; 5,8,11-ETI; 5,8,11-Eicosatriynoic Acid
4- SB 202190
GPC3 (144-152)Phe-Val-Gly-Glu-Phe-Phe-Thr-Asp-Val
α-Helical CRF (12-41)Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Met-Leu-Glu-Met-Ala-Lys-Ala-Glu-Gln-Glu-Ala-Glu-Gln-Ala-Ala-Leu-Asn-Arg-Leu-Leu-Leu-Glu-Glu-Ala-NH2
[Nle21,Tyr32] Corticotropin Releasing Factor, ovineSer-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Nle-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-Tyr-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala- NH2
Biotin-Neuromedin S (human)Biotin-Ile-Leu-Gln-Arg-Gly-Ser-Gly-Thr-Ala-Ala-Val-Asp-Phe-Thr-Lys-Lys-Asp-His-Thr-Ala-Thr-Trp-Gly-Arg-Pro-Phe-Phe-Leu-Phe-Arg-Pro-Arg-Asn-NH2
p60c-src Substrate I-Lys(Biotin)Tyr-Ile-Tyr-Gly-Ser-Phe-Lys(Biotin)
Caspase 10 活性檢測(cè)試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)本磺酰錄Benzenesulfonyl chlorideCP500mL
A8056-25G3-安基-1,2,4-三唑(3-AT) 3-Ami,2,4-triazole61-82-525G0
A0903-5GAlbumin Bovine,Fraction V,Cold Alcohol Isolation 牛血清白蛋白9048-46-85g
1kb DNA Ladder250ul
Lectin, from Arachis Hypogaea (peanut)
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