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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Herpesvirus Simiae(HVS)
貨號(hào):CP914448
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
原理:
猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,產(chǎn)品僅用于科研Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
以下是猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
Glutaraldehyde1,5-二1克BR,
Glucose oxidase葡萄糖酶100克BR,50u/mg
Glucose Dehydrogenase葡萄糖脫酶50克BR,
Glimepiride格列美脲100毫克超純,80%,粉末
GlcNAc1-α-PNP4--N-酰-α-D-基葡萄糖苷50克BR,90%
Glass Fiber纖維玻璃25克BR,99%
Ginsenoside Rh2人參皂甙Rh2100克油浴,180℃
Ginsenoside Rh1人參皂甙Rh15克BR
Ginsenoside Rg3人參皂甙Rg325克BR
Ginsenoside Rg2人參皂甙Rg225克BR
Ginsenoside Rg1人參皂甙Rg1500克BR
Ginsenoside Rf人參皂甙Rf5克色固
Ginsenoside Re人參皂甙Re5克BR
Ginsenoside Rd人參皂甙Rd1克色固
Ginsenoside Rc人參皂甙Rc500克色固
金松雙黃 英文名稱:Sciadopitysin 號(hào):521-34-6 規(guī)格:10mg
白射干素 英文名稱:Dichotomitin 號(hào):88509-91-5 規(guī)格:10mg
新異甘草苷 英文名稱:Neoisoliquiritin 號(hào):7014-39-3 規(guī)格:10Mg
新甘草苷 英文名稱:Neoliquiritin 號(hào):5088-75-5 規(guī)格:10mg
香葉木素-7-0-葡萄糖苷 英文名稱:Diosmetin-7-O-β-D-glucopyranoside 號(hào):20126-59-4 規(guī)格:10mg
菜油甾醇 英文名稱:Campesterol 號(hào):474-62-4 規(guī)格:10mg
去乙?;嚾~草苷 英文名稱:Desacetyl asperulosidic acid 號(hào):14259-55-3 規(guī)格:10mg
巴利森苷B 英文名稱:Parishin B 號(hào):174972-79-3 規(guī)格:10mg
巴利森苷C 英文名稱:Parishin C 號(hào):174972-80-6 規(guī)格:10mg
巴利森苷E 英文名稱:Parishin E 號(hào):952068-57-4 規(guī)格:10mg
猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒CarbonNanoubeMuli-walled10-20nm(diam.),5-15µm(lengh) 復(fù)壁碳納米管10-20nm(直徑),5-15μm(長(zhǎng)度) 規(guī)格:含量測(cè)定
CarbonNanoubeAlignedMuli-walled10-20nm(diam.),5-15µm(lengh) 整列式復(fù)壁碳納米管10-20nm(直徑),5-15μm(長(zhǎng)度) 規(guī)格:含量測(cè)定
CarbonNanoubeMuli-walled10-30nm(diam.),5-15µm(lengh) 復(fù)壁碳納米管10-30nm(直徑),5-15μm(長(zhǎng)度) 規(guī)格:含量測(cè)定
CarbonNanoubeMuli-walled10-30nm(diam.),1-2µm(lengh) 復(fù)壁碳納米管10-30nm(直徑),1-2μm(長(zhǎng)度) 規(guī)格:含量測(cè)定
CarbonNanoubeMuli-walled20-40nm(diam.),5-15µm(lengh) 復(fù)壁碳納米管20-40nm(直徑),5-15μm(長(zhǎng)度) 規(guī)格:含量測(cè)定
CarbonNanoubeMuli-walled20-40nm(diam.),1-2µm(lengh) 復(fù)壁碳納米管20-40nm(直徑),1-2μm(長(zhǎng)度) 規(guī)格:含量測(cè)定
CarbonNanoubeMuli-walled40-60nm(diam.),5-15µm(lengh) 復(fù)壁碳納米管40-60nm(直徑),5-15μm(長(zhǎng)度) 規(guī)格:含量測(cè)定
CarbonNanoubeMuli-walled40-60nm(diam.),1-2µm(lengh) 復(fù)壁碳納米管40-60nm(直徑),1-2μm(長(zhǎng)度) 規(guī)格:含量測(cè)定
CarbonNanoubeMuli-walled60-100nm(diam.),5-15µm(lengh) 復(fù)壁碳納米管60-100nm(直徑),5-15μm(長(zhǎng)度) 規(guī)格:含量測(cè)定
3,5-DibenzyloxybenzylBromide 3,5-二芐氧基芐溴(>98.0%(GC)()) 規(guī)格:含量測(cè)定
3,5-Bis[3,5-bis(benzyloxy)benzyloxy]benzylBromide 3,5-雙[3,5-雙(芐氧基)芐氧基]芐溴(>97.0%(HPLC)) 規(guī)格:含量測(cè)定
3,5-Bis(3,5-dimehoxybenzyloxy)benzylAlcohol 3,5-雙(3,5-二甲氧基芐氧基)芐醇(>94.0%(GC)) 規(guī)格:含量測(cè)定
3,5-Bis(3,5-dimehoxybenzyloxy)benzylBromide 3,5-雙(3,5-二甲氧基芐氧基)芐溴(>97.0%(HPLC)()) 規(guī)格:含量測(cè)定
3,5-Bis[3,5-bis(3,5-dimehoxybenzyloxy)benzyloxy]benzylBromide 3,5-雙[3,5-雙(3,5-二甲氧基芐氧基)芐氧基]芐溴(>97.0%()) 規(guī)格:含量測(cè)定
3',5'-Diaceoxyaceophenone 3',5'-二乙酰氧基酮(>95.0%(GC)) 規(guī)格:含量測(cè)定
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