乙型肝炎病毒G型探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，產(chǎn)品僅用于科研請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
相對定量簡介：
分析方法： ①雙標(biāo)曲法 ②2 － △Ct ③2 － △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡介
公式：
優(yōu)點(diǎn)：分析簡單，實(shí)驗(yàn)優(yōu)化簡單
缺點(diǎn)：對每一個(gè)基因，每一輪實(shí)驗(yàn)都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線；必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線；這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實(shí)狀態(tài)應(yīng)用：基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對定量方法之一

樣品要求及注意事項(xiàng)：
1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮，請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑，并用干冰運(yùn)輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ，也可以將樣品研磨后放在 Trigol中，動植物組織 ： 50～100mg/mlTrigol，貼壁細(xì)胞：10cm2/mlTrigol，懸浮細(xì)胞：5×106動植物，酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進(jìn)行評估。
4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

human γ-globulin人種球蛋白50kuBR，0.5u/mg

H-Tyr-OmeL-酪酯5克特純，98.5%

H-Trp-OMe•HClL-色酯鹽鹽5克特純，98.0%

H-Thr-OMe•HClL-蘇酯鹽鹽1克特純，98.0%

HSF鐵蛋白（馬脾）100uBR，10-20u/mg

H-Ser-Ome•HClL-絲酯鹽鹽5克特純，

HSD羥基甾族化合物還原酶1克BR，5u/ul，99%

H-Pro-OMe•HClL-卟啉酯鹽鹽5克特純，98.5%

H-Pro-OBzl•HClL-脯酯鹽鹽5克特純，98.0%

H-Phe-OMe•HClL-基酯鹽鹽10克特純，98.0%

H-Phe-OEt.HClL-基酯鹽鹽10克特純，99.0%

HPCD羥基倍他環(huán)糊精1毫克超純，99%

Hotstart Taq DNA PolymeraseHotstart Taq DNA聚合酶25毫克高層析純，360NADu/mg，液體

Hot Taq DNA PolymeraseHot Taq DNA聚合酶25毫克層析純，200NADu/mg，液體

HONBN-羥基-5-降稀-2,3-二酰亞100克高純，99%

芝麻林素  英文名稱：Sesamolin   號：526-07-8  規(guī)格：10mg

梣  英文名稱：Fraxinellone  號：28808-62-0  規(guī)格：20mg

植（UV98%）  英文名稱：Phytic acid  號：83-86-3  規(guī)格：20mg

竹節(jié)參皂苷IVa  英文名稱：Chikusetsu saponin Ⅳa  號：51415-02-2  規(guī)格：20mg

竹節(jié)香附素A  英文名稱：Raddeanin(Anemodeanin) A  號：89412-79-3  規(guī)格：20mg

左旋多巴   英文名稱：Levodopa  號：59-92-7  規(guī)格：20mg

棕櫚  英文名稱：Palmitic acid   號：57-10-3  規(guī)格：20mg

 紫檀芪  英文名稱：Pterostilbene  號：537-42-8  規(guī)格：20mg

紫莖女貞苷A（95%）   英文名稱：Ligupurpuroside A  號：147396-01-8  規(guī)格：10mg

紫莖女貞苷B  英文名稱：Ligupurpuroside B  號：147396-02-9   規(guī)格：10mg
乙型肝炎病毒G型探針法熒光定量PCR試劑盒Palladium(II)niradihydra　硝酸鈀　規(guī)格：干品Cefquinome>80%,BR

Palladium,powder　鈀粉(>99%,BR)　規(guī)格：干品Cloxacillin>90%,一水

Pararosanilineacea　乙酸副品紅(>85%,BS)　規(guī)格：干品Puriy≥98.0%

Paxilline*,fromPenicilliumpaxilli　鈣激活鉀通道阻斷劑來源于覃青霉　規(guī)格：干品純度≥90.0%，干品含量≥85.0%，USP34

Penicillicacid　青霉酸(>98%(HPLC),BC)　規(guī)格：干品含量>98%,USP32

PeniremAfromPenicilliumpalians　青霉震顫素(>95%(HPLC),BC)　規(guī)格：干燥劑用

Penaaceyl-β-D-galacopyranose　β-D-半乳糖五乙酸酯(>98%，BR)　規(guī)格：干燥劑用

Permui　人造沸石　規(guī)格：干燥劑用

Phenolphhaleindiphospharasodiumsal　酚肽二磷酸四鈉(>96%,BC)　規(guī)格：干燥劑用

Phenohiazine　吩噻嗪(>98%,BR)　規(guī)格：高純級,98%

Phenoxyaceiacidsodiumsal　苯氧乙酸鈉(>98%,BR)　規(guī)格：工業(yè)級

Phenylsalicyla　水楊酸苯酯(>98%,BR)　規(guī)格：工業(yè)級

PhospholipaseA2fromCroalusadamanusVenom　磷脂酶A2　規(guī)格：工業(yè)級

p-Hydroxybenzoicacidbuylesrsodiumsal　對尼泊金丁酯鈉(>98%,USP)　規(guī)格：供GC法檢查用

p-Hydroxybenzoicacidehylesrsodiumsal　尼泊金乙酯鈉(>98.5%,BR)　規(guī)格：供HPLC法測定