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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T牛莫拉氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒
?儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,產(chǎn)品僅用于科研請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
牛莫拉氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對(duì)照時(shí),由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
產(chǎn)品名稱 | 牛莫拉氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Moraxella bovis |
貨號(hào) | CP914568 |
相對(duì)定量簡介:
分析方法: ①雙標(biāo)曲法 ②2 - △Ct ③2 - △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡介
公式:
優(yōu)點(diǎn):分析簡單,實(shí)驗(yàn)優(yōu)化簡單
缺點(diǎn):對(duì)每一個(gè)基因,每一輪實(shí)驗(yàn)都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線;必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線;這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實(shí)狀態(tài)應(yīng)用:基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對(duì)定量方法之一
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟:
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為:待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
樣品要求及注意事項(xiàng):
1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料,實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮,請(qǐng)您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運(yùn)輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動(dòng)植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細(xì)胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細(xì)胞:5×106動(dòng)植物,酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對(duì)您提供的材料進(jìn)行評(píng)估。
4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。
唑尼沙胺相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zonisamide Related Compound A :73101-64-1
唑尼沙胺標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zonisamide :68291-97-4
酒石唑吡坦標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zolpidem Tartrate CIV :99294-93-6
唑吡坦標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zolpidem CIV :82626-48-0
鹽唑拉西泮標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zolazepam Hydrochloride :33754-49-3
鹽齊拉西標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Ziprasidone Hydrochloride :138982-67-9
氧化鋅標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zinc Oxide (AS) :1314-13-2
齊留通相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zileuton Related Compound C :
齊留通相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zileuton Related Compound B :
齊留通相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zileuton Related Compound A :
齊留通標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zileuton :111406-87-2
齊多夫定標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zidovudine :30516-87-1
扎西他濱相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zalcitabine Related Compound A :7481-88-1
扎西他濱標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Zalcitabine :7481-89-2
鹽育亨賓標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱:Yohimbine Hydrochloride :65-19-0
端粒酶活性TRAP實(shí)時(shí)定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
通用型DNA損傷彗星檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
通用型DNA損傷彗星檢測*試劑盒(熒光染色) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
通用型DNA損傷彗星檢測*試劑盒(銀染) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
DNA損傷彗星中性檢測*試劑盒(熒光染色) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
DNA損傷彗星中性檢測*試劑盒(銀染) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
過氧化氫處理DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
內(nèi)切核酶III處理DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
FGP處理DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
紫外線處理DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
牛莫拉氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒Medroxyprogesrone-d3 甲羥孕酮-d3 規(guī)格:美國進(jìn)口
Mehimazolehio-β-D-glucuronide 甲硫咪唑硫代-β-D-葡萄糖苷酸 規(guī)格:美國進(jìn)口
Mezlocillin 美洛西林 規(guī)格:美國進(jìn)口
DidemehylMifeprisone 二去甲基米非司酮 規(guī)格:美國進(jìn)口
22-HydroxyMifeprisone 22-羥基米非司酮 規(guī)格:美國進(jìn)口
N-DemehylMifeprisone N-去甲基米非司酮 規(guī)格:美國進(jìn)口
Mirazapine-d3 米氮平-d3 規(guī)格:美國進(jìn)口
MirazapineN-Oxide 米氮平N-氧化物 規(guī)格:美國進(jìn)口
10-OxoMirazapine(MirazapineImpuriyF) 10-氧米氮平(米氮平雜質(zhì)F) 規(guī)格:美國進(jìn)口
1-OxoMirazapine(MirazapineImpuriyC) 1-氧米氮平(米氮平雜質(zhì)C) 規(guī)格:美國進(jìn)口
8-HydroxyMirazapineβ-D-Glucuronide 8-羥基米氮平β-D-葡萄糖苷酸 規(guī)格:美國進(jìn)口
8-HydroxyMirazapine 8-羥基米氮平 規(guī)格:美國進(jìn)口
N,N-DiaceylDes-5'-chloro-4-fluorobenzylMosapride N,N-二乙酰去-5'-氯-4-氟代芐基莫沙必利 規(guī)格:美國進(jìn)口
MosaprideCiricAmide 檸檬酸莫沙必利酰胺 規(guī)格:美國進(jìn)口
Des-4-fluorobenzylMosapride 去-4-氟代芐基莫沙必利 規(guī)格:美國進(jìn)口
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