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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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犬血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

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具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號50T

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2020-06-08 11:14:48瀏覽次數(shù):141次

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犬血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品特性: 高特異性:本產(chǎn)品采用熱啟動 DNA 聚合酶,90℃以上 2min 后具有擴增活性,可大大提高 PCR 產(chǎn)物的特 異性。 靈敏度:本產(chǎn)品包含的優(yōu)化的緩沖液可檢測低拷貝數(shù)的模板,且重復(fù)性好。 高適用性:本產(chǎn)品可適用于任意熒光定量 PCR 儀。

?儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,產(chǎn)品僅用于科研請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

犬血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

產(chǎn)品名稱

犬血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱

Mycoplasma haemocanis

貨號

CP914614

 


相對定量簡介:
分析方法: ①雙標曲法 ②2 - △Ct ③2 - △△Ct ④Pfaffi法
①雙標準曲線法簡介
公式:
優(yōu)點:分析簡單,實驗優(yōu)化簡單
缺點:對每一個基因,每一輪實驗都必需做標準曲線;必需有固定的標準品做標準曲線;這些標準品并不代表樣品擴增的真實狀態(tài)應(yīng)用:基因表達調(diào)控研究中與*的兩種相對定量方法之一

實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟:
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線;
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為:待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法,所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
樣品要求及注意事項:
1、 如果提供實驗材料,實驗材料必須保證新鮮,請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細胞:5×106動植物,酵母細胞或細菌細胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進行評估。
4、 實時熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴增基因的詳細信息。

美服培標準品  英文名稱:Mifepristone   :84371-65-3

米多君相關(guān)物質(zhì)A標準品  英文名稱:Midodrine Related Compound A  :3600-87-1

咪達唑侖標準品  英文名稱:Midazolam CIV  :59467-70-8

咪康唑標準品  英文名稱:Miconazole  :22916-47-8

米勃龍標準品  英文名稱:Mibolerone CIII  :659146

美洛西林鈉標準品  英文名稱:Mezlocillin Sodium   :42057-22-7

鹽美西律標準品  英文名稱:Mexiletine Hydrochloride  :1267397

甲酪標準品  英文名稱:Metyrosine  :672-87-7

美替拉標準品  英文名稱:Metyrapone  :54-36-4

酰甲硝唑標準品  英文名稱:Metronidazole Benzoate   :13182-89-3

甲硝唑標準品  英文名稱:Metronidazole   :443-48-1

甲泛葡胺標準品  英文名稱:Metrizamide   :31112-62-6

酒石美托洛爾標準品  英文名稱:Metoprolol Tartrate   :56392-17-7

琥珀美托洛爾標準品  英文名稱:Metoprolol Succinate   :98418-47-4

富馬美托洛爾標準品  英文名稱:Metoprolol Fumarate  :119637-66-0

IOV膜性囊泡高質(zhì)純化試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:10次

 肌動蛋白(ACTIN)結(jié)合分子(binding molecules)檢測試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:20次

波形蛋白(Vimentin)結(jié)合分子(binding molecules)檢測試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:20次

微管蛋白(tubulin)結(jié)合分子(binding molecules)檢測試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:20次

肌動蛋白聚合作用(polymerization)檢測試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:20次

 微管蛋白聚合作用(polymerization)檢測試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:20次

細胞骨架(肌動蛋白微絲;F-ACTIN)綠色熒光染色試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:10次

細胞骨架(肌動蛋白單體;G-ACTIN)紅色熒光染色試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:10次

微管(microtubules)熒光染色試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:10次

粘著斑蛋白(vinculin)熒光染色試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:10次
犬血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒Actinomucor│elegans資源名稱雅致放射毛霉提供形式:凍干物人L-Selectin/CD62L ELISA試劑盒

Monascus anka資源名稱紅曲紅曲(斜面)提供形式:凍干物人IL-9 ELISA試劑盒

Corynebacterium│stationis資源名稱停滯棒桿菌提供形式:凍干物人IL-8/CXCL8 ELISA試劑盒

Bacillus│polymyxa資源名稱多粘芽孢桿菌分離基物:活性污泥人IL-6 ELISA試劑盒

Candida albicansCMCC 98001資源名稱白色念珠菌模式菌株:未知人IL-5 ELISA試劑盒

Acetobacter│sp.資源名稱醋酸桿菌屬提供形式:斜面培養(yǎng)物人IL-4 ELISA試劑盒

Morchella sp.資源名稱羊肚菌屬(斜面)提供形式:斜面培養(yǎng)物/凍干物人IL-3 ELISA試劑盒

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