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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T無(wú)乳支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
原理:
無(wú)乳支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,產(chǎn)品僅用于科研Z后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?/span>
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
參數(shù)規(guī)格:
無(wú)乳支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí),由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專(zhuān)門(mén)的區(qū)域操作。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 無(wú)乳支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 |
英文名稱(chēng) | Mycoplasma agalactiae |
貨號(hào) | CP914604 |
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DN段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
鹽羥甲唑啉標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxymetazoline Hydrochloride :151615
鹽羥考標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxycodone Hydrochloride CII :124-90-3
羥考標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxycodone CII :76-42-6
奧昔布寧標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxybutynin Chloride :1508-65-2
羥甲標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxybenzone :131-57-7
奧昔替林標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxtriphylline :4499-40-5
鹽心得平標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxprenolol Hydrochloride :6452-73-9
奧酚噠唑標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxfendazole :53716-50-0
奧卡西平標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxcarbazepine :28721-07-5
奧沙西泮標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxazepam CIV :604-75-1
奧沙普秦標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxaprozin :21256-18-8
氧雄龍標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxandrolone CIII :53-39-4
奧沙利鉑對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxaliplatin :61825-94-3
唑西林鈉標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):Oxacillin Sodium :7240-38-2
鄰甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱(chēng):o-Toluenesulfonamide :88-19-7
細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)NBT比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:100次
細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)WST-1比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:50次
卵母細(xì)胞成熟(OOCYTE MATURATION)培養(yǎng)液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:100毫升
卵母細(xì)胞凍存試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:50次
生長(zhǎng)因子 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:1ML
受精(fertilization)細(xì)胞培養(yǎng)液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升
胚胎組織培養(yǎng)液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升
活力熒光染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:50次
活力伊紅黑(eosin-nigrosin)染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:50次
活力和頂體反應(yīng)三色(triple staining)染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:50次
無(wú)乳支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒Brevibacterium│ketosoreductum資源名稱(chēng)降酮短桿菌分離基物:土壤人IFN-α ELISA試劑盒
Listeria│grayi資源名稱(chēng)格氏李斯特氏菌提供形式:凍干物人B7-2/sCD86 ELISA試劑盒
Eupenicillium│brefeldianum資源名稱(chēng)布雷正青霉提供形式:凍干物人IL-27 ELISA試劑盒
Eupenicillium│parvum資源名稱(chēng)微細(xì)正青霉分離基物:土壤人IL-23 ELISA試劑盒
Talaromyces│ruber資源名稱(chēng)紅色籃狀菌分離基物:植物塊根人MIF ELISA試劑盒
Eupenicillium│ochrosalmoneum資源名稱(chēng)赭鮭色正青霉分離基物:玉米粉人TFPI ELISA試劑盒
Salmonella│enterica subsp. enterica資源名稱(chēng)腸沙門(mén)氏菌腸亞種提供形式:凍干物人IP-10/CXCL10 ELISA試劑盒
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