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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T雷氏普羅威登斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒
?儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),產(chǎn)品僅用于科研請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
雷氏普羅威登斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí),由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
產(chǎn)品名稱 | 雷氏普羅威登斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Providencia rettgeri |
貨號(hào) | CP914752 |
相對(duì)定量簡(jiǎn)介:
分析方法: ①雙標(biāo)曲法 ②2 - △Ct ③2 - △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡(jiǎn)介
公式:
優(yōu)點(diǎn):分析簡(jiǎn)單,實(shí)驗(yàn)優(yōu)化簡(jiǎn)單
缺點(diǎn):對(duì)每一個(gè)基因,每一輪實(shí)驗(yàn)都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線;必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線;這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實(shí)狀態(tài)應(yīng)用:基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對(duì)定量方法之一
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟:
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為:待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
樣品要求及注意事項(xiàng):
1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料,實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮,請(qǐng)您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運(yùn)輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動(dòng)植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細(xì)胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細(xì)胞:5×106動(dòng)植物,酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對(duì)您提供的材料進(jìn)行評(píng)估。
4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。
堿性磷酶染色液(改良Gomori鈣鈷法), 規(guī)格3*50ml 進(jìn)口/原裝
堿性磷酶-PAS聯(lián)合染色液, 規(guī)格6*50ml 進(jìn)口/原裝
中性粒細(xì)胞堿性磷酶染色液(NAP), 規(guī)格4*10ml 進(jìn)口/原裝
中性粒細(xì)胞堿性磷酶染色液(NAP), 規(guī)格4*2ml 進(jìn)口/原裝
堿性磷酶染色液(偶氮偶聯(lián)法), 規(guī)格4*10ml 進(jìn)口/原裝
堿性磷酶染色液(偶氮偶聯(lián)法), 規(guī)格4*20ml 進(jìn)口/原裝
堿性磷酶染色液(偶氮偶聯(lián)法), 規(guī)格4*2ml 進(jìn)口/原裝
抗酒石性磷酶染色液, 規(guī)格4*10ml 進(jìn)口/原裝
抗酒石性磷酶染色液, 規(guī)格4*20ml 進(jìn)口/原裝
性磷酶染色液(偶氮偶聯(lián)法), 規(guī)格4*10ml 進(jìn)口/原裝
性磷酶染色液(偶氮偶聯(lián)法), 規(guī)格4*20ml 進(jìn)口/原裝
性磷酶染色液(偶氮偶聯(lián)法), 規(guī)格4*2ml 進(jìn)口/原裝
性磷酶染色液(硝鉛法), 規(guī)格2*50ml 進(jìn)口/原裝
β-半乳糖苷酶染色試劑盒, 規(guī)格100T 進(jìn)口/原裝
基肽酶染色液(同時(shí)偶聯(lián)法), 規(guī)格3*20ml 進(jìn)口/原裝
組蛋白H2B-K16乙酰化檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
組蛋白H2B-K46乙?;瘷z測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
組蛋白H2B-K120乙酰化檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
組蛋白H3乙?;瘷z測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
組蛋白H3-K4乙?;瘷z測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
組蛋白H3-K14乙?;瘷z測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
組蛋白H3-K18乙?;瘷z測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
組蛋白H3-K23乙?;瘷z測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
組蛋白H3-K27乙?;瘷z測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
組蛋白H3-K36乙?;瘷z測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次等
雷氏普羅威登斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒Bifidobacterium breve資源名稱短雙歧桿菌提供形式:凍干物人Arg ELISA試劑盒
Bifidobacterium infantisreuter資源名稱嬰兒雙歧桿菌提供形式:凍干粉人Arg ELISA試劑盒
Lactobacillus sakei subsp. sakei資源名稱清酒乳桿菌清酒亞種分離基物:清酒自動(dòng)發(fā)酵劑人NAP ELISA試劑盒
Bacillus licheniformis (Weigmann)Chesteremend.Gibson資源名稱地衣形芽孢桿菌提供形式:凍干粉人ALK ELISA試劑盒
Herbaspirillumcanariense資源名稱Herbaspirillumcanariense分離基物:土壤,西班牙人CKMB ELISA試劑盒
Herbaspirillumaurantiacum資源名稱Herbaspirillumaurantiacum分離基物:土壤,西班牙人MLCK ELISA試劑盒
Herbaspirillumsoli資源名稱Herbaspirillumsoli分離基物:土壤,西班牙人GSTpi ELISA試劑盒
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