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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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變形桿菌熒光PCR 法檢測試劑盒

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產(chǎn)品型號50T

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-07-15 20:34:05瀏覽次數(shù):130次

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變形桿菌熒光PCR 法檢測試劑盒客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。

產(chǎn)品名稱

變形桿菌熒光PCR 法檢測試劑盒

規(guī)格

50T

貨號

CP99400

PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93-94)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?/span>5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。

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特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2.   重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%
3.   靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6.   優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
引物擴(kuò)增跨度: 200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.11umol10100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
109523-13-9  Boc-L-octahydroindole-2-carboxylic acid  1g  Chicken Anemia Virus(CAV)雞貧血病毒LAMP試劑盒  動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒  50  低溫  負(fù)20

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煙酸腺嘌呤二核苷酸鈉鹽Nicotinic acid adenine dinucleotide  salt質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口  動物皮膚組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10  中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒 ,英文名: NE ELISA Kit

α-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸α-Nicotinamide adenine dinucleotide質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口  Ratproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISA試劑盒大鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  Humanurokinaseplasminogenactivator,uPAELISA試劑盒人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

NAD+, 鋰鹽NAD+, Lithium Salt質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口  小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISA試劑盒 ,英文名: CP/CER ELISA Kit  ELISAKitACP-5b小鼠抗酸酸性1酸酶5b規(guī)格:48T/96T

硫代水楊酸(>98%,BR)Thiosalicylic acid質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR  小鼠白介素11(IL-11)ELISA檢測試劑盒MouseIerleukin11,IL-11ELISAKIT 96T/48T  Humanai-cytomegalovirusIgMaibody,ai-CMVIgMELISAKit人胎兒血紅蛋白(HBF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
變形桿菌熒光PCR 法檢測試劑盒CXCL16 Protein Canine 重組狗 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)2,7-二溴-9,9-二己基芴(>98.0%(HPLC))2,7-Dibromo-9,9-dihexylfluorene質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)

MGC80-3(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FGFR2 / CD332 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2,7-二溴-9,9-二正辛基芴(>98.0%(HPLC))2,7-Dibromo-9,9-di-n-octylfluorene質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)

黃牛皮膚細(xì)胞;BTA-S24,5-亞乙基二硫代-1,3-二硫醇-2-硫酮(>98.0%(GC))4,5-Ethylenedithio-1,3-dithiole-2-thione質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)

IL18R1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18R1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4,5-乙撐二硫代-1,3-二硫酚-2-(>98.0%(GC))4,5-Ethylenedithio-1,3-dithiol-2-one質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)

腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)4,5-甲二硫基-1,3-二硫醇-2-(>95.0%(HPLC))4,5-Methylenedithio-1,3-dithiol-2-one質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
兩相分離 1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,1530孵育23分鐘。412000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530孵育10分鐘后,于412000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,47000rpm離心5分鐘。
RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

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