人腦膜細(xì)胞提取物【Human Brain: Normal Brain Meninges CellsDerivatives】 人腦膜細(xì)胞分離自正常人腦膜組織，主要功能：（1）腦膜細(xì)胞圍繞著大腦，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育。（2）細(xì)胞能穩(wěn)定腦軟膜表面的細(xì)胞外基質(zhì)、組織放射狀膠質(zhì)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)和小腦皮層分層結(jié)構(gòu)。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

收到凍存細(xì)胞的處理方法：
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
1163135-92-9  15(R)-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  10mg  Paranavirus(PARV)帕臘南病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 

1163135-92-9  15(R)-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  1mg  Dermacenter spp.革蜱探針法熒光定量PCR試劑盒 

1163135-92-9  15(R)-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  500&#956;g  Dermacenter spp.革蜱探針法熒光定量PCR試劑盒 

1163135-92-9  15(R)-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  5mg  Paranavirus(PARV)帕臘南病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 

1163135-95-2  5-trans-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  10mg  Highlands J Virus高地J病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;KMY10221-氨基蒽(>98.0%(GC)(T))1-Aminoanthracene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)

CNE細(xì)胞，鼻咽癌細(xì)胞 鼠骨髓瘤細(xì)胞,SP2/0-Ag14細(xì)胞 恒河猴皮膚細(xì)胞;RM-S19-溴蒽(>95.0%(GC))9-Bromoanthracene質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

NAMALWA(Butt's瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×22'-脫氧鳥苷-13C,15N22'-Deoxyguanosine-13C,15N2質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

Promocell C-24110 Melanocyte Growth Medium KIT, 色素細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基套裝 500mlO6-[4-(氨)芐基]鳥嘌呤O6-[4-(Aminomethyl)benzyl]guanine質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

色素細(xì)胞生長(zhǎng)生長(zhǎng)添加物MelGS阿糖鳥嘌呤水合物Ara-G hydrate質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
人腦膜細(xì)胞提取物操作NCI-H520[H520]細(xì)胞，肺癌細(xì)胞 膀胱癌細(xì)胞,EJ細(xì)胞 心肌細(xì)胞HCM氯吡脲；氯吡苯脲；吡效隆質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRForchlorfenuron,4-CPPU,CPPU,KT-30

長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚成纖維樣細(xì)胞;201184醋酸鎂四水(分子生物學(xué)級(jí))質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí)Magnesium acetate, tetrahydrate

MMP9 Others Human  MMP-9 / CLG4B 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 萘丁美酮/萘普酮（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Nabumetone

CM-R060大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL地瑞拉韋質(zhì)量規(guī)格：>98%Darunavir

JAM3 Others Human  JAM3 / JAM-C 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 沃氏物質(zhì)量規(guī)格：含量≥85%Methoxydienone
注意事項(xiàng)：
1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。