大鼠腎小管上皮細(xì)胞提取物【Rat Kidney: Normal Renal Tubular Derivatives】 大鼠腎小管上皮細(xì)胞提取物是從大鼠原代腎小管上皮細(xì)胞提取的，大鼠原代腎小管上皮細(xì)胞從正常大鼠腎小管組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

收到凍存細(xì)胞的處理方法：
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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NK-92細(xì)胞，惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細(xì)胞 肝癌細(xì)胞系,Hep-3B細(xì)胞 CL-0184PANC-1(胰腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2二硫代乙酰胺(>98%,BR)Dithiooxamide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CTLA4 Ig-24脫氧核糖核酸酶 IIDNase II, from Pocine Pancreas質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級

SLAMF1 Others Human  CD150 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 5-硝基吲哚(>98.0%(GC))5-Nitroindole質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

結(jié)腸平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鋁酞菁(>98.0%(T))Phthalocyanine Chloroaluminum質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

HEPACAM2 Others Rat 大鼠 HepaCAM2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 酞菁鐵(II)(升華提)(>98.0%(T))Iron(II) Phthalocyanine (purified by sublimation)質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)
大鼠腎小管上皮細(xì)胞提取物說明RK3 Others Mouse 小鼠 RK3 / kC 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 磺胺二甲嘧啶質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BRSulfamethazine

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3磺胺二甲嘧啶 （標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品Sulfamethazine

CXCL16 Others Canine  CXCL16 / SR-PSOX 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 糖精（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：校準(zhǔn)溫度計用Saccharin

Caco-2，結(jié)直腸腺癌細(xì)胞酚酞（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：熔點(diǎn)測定Phenolphthalein

NEI-H209細(xì)胞，小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 前列腺癌細(xì)胞,22RV1細(xì)胞 脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞RNAHCPF miRNA5 μg磺胺（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：檢查Sulfanilamide
注意事項(xiàng)：
1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。