當前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞培養(yǎng)>>細胞,組織提取物>> T25m2大鼠內(nèi)臟脂肪細胞提取物操作
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠內(nèi)臟脂肪細胞提取物操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-964196 |
大鼠內(nèi)臟脂肪細胞提取物【Rat Fat: Normal Visceral Fat Cells Derivatives】大鼠內(nèi)臟脂肪細胞提取物是從大鼠原代內(nèi)臟脂肪細胞提取的,大鼠原代內(nèi)臟脂肪細胞從正常大鼠脂肪組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
1135278-41-9 SR 59230A hydrochloride 1mg Burkholderia pseudomallei類鼻疽伯克霍爾德菌LAMP試劑盒
1135278-41-9 SR 59230A hydrochloride 25mg Burkholderia cepacia洋蔥伯克氏菌LAMP試劑盒
1135278-41-9 SR 59230A hydrochloride 5mg Burkholderia mallei鼻疽伯克霍爾德氏菌LAMP試劑盒
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1135278-61-3 3'-Fluorobenzylspiperone maleate 50mg Burkholderia spp.伯克氏菌通用LAMP試劑盒
TNFSF11 Protein Human 重組 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標簽)腺苷3′,5′-環(huán)單硫代1酸酯,8-氯-,Rp-異構(gòu)體鈉鹽Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate, 8-Chloro-, Rp-Isomer, Salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
視網(wǎng)膜色素上皮細胞(HRPEpiC)(5×105 ) HL-02 [L-02,HL-7702], 正常肝上皮細胞 Human阿西替尼Axitinib質(zhì)量規(guī)格:>99%,VEGFR 抑制劑,細胞培養(yǎng)級
肺巨細胞癌低轉(zhuǎn)移細胞株;PG-LH7阿扎哌隆Azaperone質(zhì)量規(guī)格:>99%
IFNA13 Others Mouse 小鼠 IFNA13 / Ierferon alpha-13 細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸阿扎司瓊Azasetron HCl質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
MM, 小鼠小膠質(zhì)細胞氮卓斯汀堿Azelastine base 質(zhì)量規(guī)格:>97%
大鼠內(nèi)臟脂肪細胞提取物操作神經(jīng)母細胞瘤細胞;SK-N-SH莫諾苷質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標準品Morroniside
HepG2.2.15細胞,表達HBV病毒的肝細胞 小鼠胃癌細胞,MFC細胞 非洲綠猴腎細胞;VERO牡荊素(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Vitexin
MG-63(骨肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2牡荊素葡萄糖苷(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Glucosyl-vitexin
Promocell C-23060 Skeletal Muscle Cell GrowthMedium, 骨骼肌細胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml牡荊素鼠李糖苷(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品vitexin-2″-o-rhamnoside
胰島β細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)米卡芬凈鈉質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRMicafungin
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