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大鼠腦膜細胞提取物操作

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具體成交價以合同協(xié)議為準

產品型號T25m2

品       牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-06-21 20:07:16瀏覽次數(shù):127次

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大鼠腦膜細胞提取物操作如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞處理:

1 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

產品名稱

規(guī)格

貨號

大鼠腦膜細胞提取物操作

T25m2

CS-964192

大鼠腦膜細胞提取物【Rat Brain: Normal Meningeal Cells Derivatives】大鼠腦膜細胞提取物是從大鼠原代腦膜細胞提取的,大鼠原代腦膜細胞從正常大鼠腦組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mgRNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞處理方法:
以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度,細胞生長狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細技術指導,請及時電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細胞
客戶接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應該在37度培養(yǎng)箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應預留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶,37,5%CO2  培養(yǎng)。
二.懸浮細胞
1. 接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37,5%CO2  培養(yǎng)細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1213的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。
1135318-57-8  ML-095 (hydrochloride)  5mg  Treponema pertenue極細密螺旋體LAMP試劑盒 

1135339-49-9  2,3-Dehydro-3,4-dihydro Ivermectin  10mg  Treponema pallidum梅毒螺旋體(蒼白密螺旋體)LAMP試劑盒 

1135339-49-9  2,3-Dehydro-3,4-dihydro Ivermectin  1mg  Treponema pallidum subsp. Pallidum梅毒螺旋體梅毒亞種LAMP試劑盒 

1135339-49-9  2,3-Dehydro-3,4-dihydro Ivermectin  5mg  Treponema pallidum梅毒螺旋體(蒼白密螺旋體)LAMP試劑盒 

113534-16-0  Fmoc-Asn(Dod)-OH  1g  Treponema hyodysenteriae豬痢疾密螺旋體LAMP試劑盒
TGFBR3 Others Mouse 小鼠 TGFBR3 / Betaglycan 細胞裂解液 (陽性對照) 1,3-(六氟-α-羥基異丙基)(>98.0%(GC))1,3-Bis(hexafluoro-α-hydroxyisopropyl)benzene質量規(guī)格:>98.0%(GC)

NCI-H446 小細胞肺癌細胞β-NADH;還原性輔酶I二鈉鹽β-NADH.hydrate質量規(guī)格:>90%,羅氏分包

hDPSCs, 前磨牙牙髓干細胞蘇拉明鈉Suramin 質量規(guī)格:>98%,BR

臍動脈平滑肌細胞彈性蛋白酶Elastase, pancreatic from porcine pancreas質量規(guī)格:30 units/mg

正常上皮細胞;MCF 10A 胰腺星狀細胞*培養(yǎng)基 100mL脂肪酶Lipase質量規(guī)格:20000U/g,BR
大鼠腦膜細胞提取物操作腦星形膠質母細胞瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG] 大鼠軟骨細胞*培養(yǎng)基 100mLGalNAc1-β-PNP4-硝基本-N-乙酰-β-D-基半乳糖苷250BR,98%

EL4 小鼠瘤細胞二縮水甘油迷;二環(huán)氧甘油迷 1,4-Butcnqdiol diglycidyl qtqr; 42-79-8

PRSS3 Others Human  ypsin-3 / PRSS3 細胞裂解液 (陽性對照) 溴東莨菪減 MqthscopolcMinq BroMidq 122-41-9

Asp2胚胎腎細胞轉化細胞;FC33etxylenediaminedixy7nochloride鹽酸乙二安500BR

SRC Others Human  SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) B12培養(yǎng)基瓊脂USP(+4)NA
我公司提供原代細胞、細胞系、細胞株和菌種,細胞庫管理規(guī)范,提供的細胞株背景清楚,提供參考文獻和*培養(yǎng)條件。純度可達 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

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