當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>細(xì)胞,組織提取物>> T25m2小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物操作
注意事項:
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-964204 |
小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物【Human Cerebellum MatchPair: Normal Cerebellar Granule Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】人小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人原代小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的,人原代小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人小腦組織和腫瘤組織中制備。正常人小腦組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
113418-56-7 Wy 49051 1mg African Swine Fever Virus(ASFV)非洲豬瘟病毒LAMP試劑盒
113418-56-7 Wy 49051 20mg Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1O)免疫缺陷病毒1型O群RT-LAMP試劑盒
113418-56-7 Wy 49051 5mg Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1N)免疫缺陷病毒1型N群RT-LAMP試劑盒
1134188-26-3 Epimagnolin B 10mg Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1M-K)免疫缺陷病毒1型M群K型RT-LAMP試劑盒
1134188-26-3 Epimagnolin B 1mg Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1O)免疫缺陷病毒1型O群RT-LAMP試劑盒
WI-38細(xì)胞,二倍體細(xì)胞系 EBV陽性B瘤細(xì)胞,P3HR1細(xì)胞 615小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤瘤株;DCS2-十八1酸單甘油酯2-Oleoylglycerol質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
Bcap-37(癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×21-月桂酰-3-氯1-Lauroyl-3-chloropropanediol質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
CTSL1 Others Human CTSL1 / Cathepsin-L1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4-丁基苯(>95.0%(GC))4-Butylbenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)
急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞;TALL-1044-芐氧基苯(>98.0%(GC))4-Benzyloxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
RET Others Human RET Kinase 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4-癸氧基苯(>97.0%(GC))4-Decyloxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)
小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物操作PC-3前列腺癌細(xì)胞 Human prostate cancer PC-3 cells F-12培養(yǎng)基+10%FBS鹽酸苯海索(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Benzhexol
SCG2 Protein Human 重組 SCG2 / Secretogranin II 蛋白 (His 標(biāo)簽)葉酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Folic acid
小鼠腹脊髓神經(jīng)細(xì)胞(MN-vsc)(1×106) lovo, 結(jié)腸癌細(xì)胞 Human葡萄糖酸鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:檢查Calcium gluconate
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163雙羥萘酸噻嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Pyrantel pamoate
VNN1 Others Mouse 小鼠 VNN1 / Vanin-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 頭孢唑啉,唑啉頭孢菌素質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRCefazolin
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