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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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人腎足突基底膜組織提取物操作

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具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號T25m2

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-06-21 20:39:50瀏覽次數(shù):129次

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人腎足突基底膜組織提取物操作收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項:
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,375%CO2培養(yǎng)。

產(chǎn)品名稱

人腎足突基底膜組織提取物操作

規(guī)格

T25m2

貨號

CS-964236

人腎足突基底膜組織提取物【Human kidney: Normal kidney Foot Processes Basement MembraneDerivatives】腎小囊臟層是腎小管起始部膨大凹陷而成的杯狀雙層囊,分壁層和臟層。公司科技提供來自新鮮或冷凍人腎足突基底膜組織中高質(zhì)量的總RNAPCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRBHIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mgRNA68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊)
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 
2
.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3
.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4
.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率; 
5
.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
3、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 ,5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
112885-41-3  Mosapride  5mg  Cheilospirura hamulosa唇飾帶線蟲LAMP試劑盒 

112885-42-4  Mosapride Citrate  100mg  Microsporum nanum納米小孢子菌LAMP試劑盒 

112885-42-4  Mosapride Citrate  10mM(in1mLDMSO)  Mud Crab Dicistrovirus (MCDV)青蟹雙順反子病毒LAMP試劑盒 

112885-42-4  Mosapride Citrate  25mg  Mud Crab Dicistrovirus (MCDV)青蟹雙順反子病毒LAMP試劑盒 

112885-42-4  Mosapride Citrate  5mg  Avian Orthoreovirus禽正呼腸孤病毒RT-LAMP試劑盒
間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基MSCM-sf右佐匹克隆(標(biāo)準(zhǔn)品)Es質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

GST Others Schistosoma japonicum 日本血吸蟲 Glutathione S-ansferase / GST 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 醋酸曲安奈德Triamcinolone Acetonide Acetate質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR

胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-25-(4-甲氧羰基苯基)-10,15,2-三苯基卟吩(>90.0%(HPLC))5-(4-Methoxycarbonylphenyl)-10,15,20-triphenylporphyrin質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(HPLC)

EL4. IL-2細(xì)胞,瘤細(xì)胞 結(jié)腸癌細(xì)胞,Loo細(xì)胞 CM-H037結(jié)腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL2-萘甲酰氯(>98.0%(GC)(T))2-Naphthoyl Chloride質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)

大鼠骨髓瘤細(xì)胞;IR983F4-二氨基肉桂醛(>98.0%(T))4-Dimethylaminocinnamaldehyde質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)
人腎足突基底膜組織提取物操作Promocell C-28015 Mesenchymal Stem CellNeurogenic Differe. Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)性分化培養(yǎng)基(即用型) 100ml吡羅昔康(標(biāo)準(zhǔn)品)Piroxicam質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞HCAEC泊沙康唑Posaconazole質(zhì)量規(guī)格:>99%

SERPINE1 Others Rat 大鼠 SerpinE1 / PAI-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 泊沙康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Posaconazole質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-1利福昔明Riimin質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

大鼠骨髓瘤細(xì)胞;Y3-Ag 1.2.3 肺腺癌細(xì)胞,SPC-A-1細(xì)胞 B/c-ES細(xì)胞,BALB/c小鼠ES細(xì)胞利福昔明(標(biāo)準(zhǔn)品)Riimin質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

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