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我公司提供原代細(xì)胞、細(xì)胞系、細(xì)胞株和菌種,細(xì)胞庫管理規(guī)范,提供的細(xì)胞株背景清楚,提供參考文獻(xiàn)和*培養(yǎng)條件。純度可達(dá) 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
小鼠小腦組織提取物直銷 | T25m2 | CS-964293 |
小鼠小腦組織提取物【Brain: Normal Mouse Cerebellar Derivatives】小腦組織是位于大腦半球后方,參與軀體平衡和肌肉張力的調(diào)節(jié),以及隨意運(yùn)動(dòng)的協(xié)調(diào)。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠小腦組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?/span><2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞處理方法:
以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度,細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo),請及時(shí)電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細(xì)胞
客戶接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細(xì)胞
1. 接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2 培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。
1119249-30-7 Tos-PEG2-O-Propargyl 100mg Babesia spp.巴貝斯屬蟲通用LAMP試劑盒
1119249-30-7 Tos-PEG2-O-Propargyl 10mg Babesia bigemina雙芽巴貝斯蟲LAMP試劑盒
1119249-30-7 Tos-PEG2-O-Propargyl 50mg Babesia bigemina雙芽巴貝斯蟲LAMP試劑盒
1119249-30-7 Tos-PEG2-O-Propargyl 5mg Babesia bovis牛巴貝斯蟲LAMP試劑盒
1119-33-1 H-Glu(OEt)-OH 100g Lactobacillus salivarius唾液乳酸桿菌LAMP試劑盒
肺間充質(zhì)干細(xì)胞HPMSC吡嗪酰胺Pyrazinamide質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP
REG4 Others Rat 大鼠 REG4 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 阿魏酸,柏酸,反式阿魏酸Ferulic acid質(zhì)量規(guī)格:>99%,合成
大鼠食管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL阿魏酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Ferulic acid質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
A7r5 大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 A7r5 rat thoracic aortic smooth muscle cells 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS安石榴苷Punicalagin (40%)質(zhì)量規(guī)格:40%,BR
EGFL7 Protein Human 重組 EGFL7 / VE-statin 蛋白 (His 標(biāo)簽)安石榴甙(標(biāo)準(zhǔn)品)Punicalagin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠小腦組織提取物直銷前脂肪細(xì)胞-內(nèi)臟HPA-v格列本脲(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Glyburide/Gliebenclamide
NCI-H1869[H1869]細(xì)胞,肺癌細(xì)胞 膀胱癌細(xì)胞,BIU-87細(xì)胞 肝臟間充質(zhì)干細(xì)胞HMSC-hp格列美脲(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Glimepiride
水貂肺上皮細(xì)胞;Mv.1.Lu(NBL-7)格列美脲質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRGlimepiride
IgG1 Others Mouse 小鼠 IgG1-Fc 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 灰黃霉素質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRGriseofulvin;Fulcin
CM-R028大鼠食管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL灰黃霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品Griseofulvin
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