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  • 上海莼試生物技術(shù)有限公司
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    人支氣管上皮細(xì)胞提取物說明

    參  考  價(jià)面議
    具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

    產(chǎn)品型號T25m2

    品       牌

    廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

    所  在  地上海市

    更新時(shí)間:2021-06-21 09:01:12瀏覽次數(shù):259次

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    人支氣管上皮細(xì)胞提取物說明收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

    注意事項(xiàng):
    1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
    ,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
    2.75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
    3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
    4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
    5.PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
    6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
    7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,375%CO2培養(yǎng)。

    產(chǎn)品名稱

    人支氣管上皮細(xì)胞提取物說明

    規(guī)格

    T25m2

    貨號

    CS-963939

    人支氣管上皮細(xì)胞提取物【Human Lung: Normal Bronchial Epithelial Cell Derivatives】人支氣管上皮細(xì)胞提取物是從人原代支氣管上皮細(xì)胞提取的,人原代支氣管上皮細(xì)胞從正常人支氣管上皮組織制備。正常人支氣管上皮組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

    RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

    cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mgRNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

    蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

    潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
    收到凍存細(xì)胞的處理方法:
    1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
    2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
    3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min
    4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
    5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
    6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
    實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
    1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 
    2
    .所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
    3
    .蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動作要輕; 
    4
    .如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 
    5
    .如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
    實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
    一、分離與培養(yǎng):
    1、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
    3、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 ,5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
    5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
    二、免疫熒光鑒定:
    1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min
    2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min;
    3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
    5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
    6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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    3T3細(xì)胞,小鼠成纖維細(xì)胞 COLO 205(結(jié)腸癌細(xì)胞) 腎透明細(xì)胞癌;Caki-1(1S,4S)-N-去甲基鹽酸舍曲林(1S,4S)-N-Desmethyl Sertraline 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    CSF2 Protein Mouse 重組小鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 標(biāo)簽)N-去甲基利福平N-Demethyl Rifampin質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    T-47D(管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 去甲基波生坦Desmethyl Bosentan質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    表皮色素細(xì)胞-淺色素HEM-l羥基去甲基波生坦Hydroxy Desmethyl Bosentan質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    CD22 Others Human  Siglec-2 / CD22 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 波生坦Bosentan質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
    人支氣管上皮細(xì)胞提取物說明表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HDMEC)( 5×105 ) 少突膠質(zhì)細(xì)胞 Human雷氏曼著色劑質(zhì)量規(guī)格:BSLeishman's stain

    CM-H033腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL來普霉素B 1%溶液質(zhì)量規(guī)格:>95%(HPLC),BCLeptomycin B 1% soluton

    DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 醋酸氟氫可的(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量97%-103%,標(biāo)準(zhǔn)品Fludrocortisone acetate

    腦血管平滑肌細(xì)胞HBVSMC醋酸氟氫可的質(zhì)量規(guī)格:>97%Fludrocortisone acetate

    HEL細(xì)胞,紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞 小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化),M-1細(xì)胞 成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM-acf阿折地平質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRAzelnidipine

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