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人腹膜毛細血管內皮細胞提取物說明

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具體成交價以合同協(xié)議為準

產品型號T25m2

品       牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-06-21 08:59:00瀏覽次數:189次

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人腹膜毛細血管內皮細胞提取物說明收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,375%CO2培養(yǎng)。

產品名稱

人腹膜毛細血管內皮細胞提取物說明

規(guī)格

T25m2

貨號

CS-963955

人腹膜毛細血管內皮細胞提取物【Human Peritoneal : Normal Peritoneal Capillary Endothelial Cell Derivatives】人腹膜毛細血管內皮細胞提取物是從人腹膜毛細血管內皮細胞提取的,人腹膜毛細血管內皮細胞從正常人腹膜組織制備。正常人腹膜組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據IRB HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mgRNA68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
2
.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理; 
3
.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4
.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
5
.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
3、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細胞過夜;
5PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
117342-78-6  Mephedrone metabolite (hydrochloride) ((&#177;)-ephedrine stereochemistry)  500&#956;g  Egg Drop Syndrome Virus-1976(EDSV-76)雞減蛋綜合征病毒-1976探針法熒光定量PCR試劑盒 

117342-78-6  Mephedrone metabolite (hydrochloride) ((&#177;)-ephedrine stereochemistry)  5mg  Chicken Infectious Anemia Virus(CIAV)雞傳染性貧血病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 

117345-87-6  BNP-32 (porcine)  0.5mg  Chicken Infectious Anemia Virus(CIAV)雞傳染性貧血病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 

117345-87-6  BNP-32 (porcine)  1mg  Influenza Virus C丙型流感病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 

117354-64-0  2-Hydroxysaclofen  10mg  Influenza Virus C丙型流感病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
AM(腺樣囊性癌細胞(高轉移)) 5×106cells/瓶×2 綠色熒光蛋白標記小鼠前胃癌細胞;MFC-GFP鹽酸貝他定(進口)Bestatin HCl質量規(guī)格:≥98%,美國進口

表皮色素細胞-中色素總RNAHEM-m NAN-十八烷酰二氫-D--鞘氨醇N-Stearoyldihydro-D-erythro-Sphingosine質量規(guī)格:美國進口

SERPINB4 Others Human  SerpinB4 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Fmoc-3-苯甲酰--鞘氨醇Fmoc-3-benzoyl-erythro-sphingosine質量規(guī)格:美國進口

敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21D--鞘氨醇(硫酸)D-erythro-Sphingosine (sulfate)質量規(guī)格:美國進口

BEL-7404細胞,肝癌細胞 膜腺癌細胞,HEC-1-B細胞 小鼠肺腺癌低轉移細胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達);LA1-VAP33-GFPD--鞘氨醇-1-1酸鹽D-erythro-Sphingosine-1-phosphate質量規(guī)格:美國進口
人腹膜毛細血管內皮細胞提取物說明肺成纖維細胞 (HPF)( 5×105 ) mOPC, 小鼠少突膠質前體細胞 Mouse萘哌地爾質量規(guī)格:>98%,BRNaftopidil di

中國倉鼠卵巢細胞;CHO萘哌地爾(標準品)質量規(guī)格:含量測定Naftopidil di

CES1D Others Mouse 小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 細胞裂解液 (陽性對照) 厄貝沙坦(標準品)質量規(guī)格:含量測定Irbesartan

CL-0085GBC-SD(膽囊癌細胞)5×106cells/瓶×2馬來酸替加色羅(標準品)質量規(guī)格:UV法含量測定Tegaserod maleate

Hela/DDP細胞,Hela細胞耐藥亞株 急性T母細胞白血病細胞,MOLT-4細胞 小鼠肺腺癌低轉移細胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達);LA1-VAP33-GFP蛻皮激素(標準品)質量規(guī)格:HPLC98%,標準品Ecdysterone

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