當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T肺炎支原體(MP)熒光-PCR法檢測試劑盒
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:肺炎支原體(MP)熒光-PCR法檢測試劑盒
產(chǎn)品分類:熒光-PCR法
貨號:CP99955
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。
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異水飛薊賓(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Isosilybin RabbitEpidermalgrowthfactor,EGFELISA試劑盒兔子表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒 ,英文名: pANCA ELISA Kit
3,3’-二沒食子酸酯茶黃素(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.0%(HPLC)Theaflavin 3,3′-digallate 小鼠成纖維細(xì)胞生長因子3(FGF3)ELISA試劑盒 ,英文名: FGF3 ELISA Kit RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISA試劑盒大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
對茴香醛乙醇溶液(含乙酸和硫酸)質(zhì)量規(guī)格:用于薄層色譜顯色劑p-Anisaldehyde (contains Acetic Acid, H2SO4) Ethanol Solution 人鞭毛蛋白(flagellin)ELISA檢測試劑盒HumanflagellinELISAKit 96T/48T HumanElastin,ELNELISA試劑盒人彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
二甲亞砜-d6 99.9原子%D(>99.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)Dimethyl Sulfoxide-d6 99.9atom%D 大鼠流行性出血熱IgG抗體試劑盒 Rat epidemic hemorrhagic fever IgG aibody ELISA kit Humanheparin-bindingepidermalgrowthfactor-likegrowthfactor,HB-EGFELISAKit人肝素結(jié)合性表皮生長因子(HB-EGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
肺炎支原體(MP)熒光-PCR法檢測試劑盒VNN1 Others Human 人 VNN1 / Vanin-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2,6-萘二羧酸(>98.0%(GC)(T))2,6-Naphthalenedicarboxylic Acid質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E21,4-萘二羧酸(>95.0%(T))1,4-Naphthalenedicarboxylic Acid質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(T)
TSPAN7 Others Cynomolgus 食蟹猴 TALLA-1 / TSPAN7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1,4-雙(基硅基)-1,3-丁二炔(>99.0%(GC))1,4-Bis(trimethylsilyl)-1,3-butadiyne質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
CL-0237U251(人膠質(zhì)瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×21-代丁炔(含穩(wěn)定劑銅屑)(>98.0%(GC))1-Butynyl Iodide (stabilized with Copper chip)質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
MM96L細(xì)胞,色素瘤細(xì)胞 人急性成髓細(xì)胞白血病,Kasumi-1細(xì)胞 人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;BT-4743-丁炔(>98.0%(GC))3-Chloro-1-butyne質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
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