當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>PCR檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 48T 0.2PCR管貝類甲肝病毒RNAPCR-熒光探針法檢測試劑盒
參數規(guī)格:
產品名稱:貝類甲肝病毒RNAPCR-熒光探針法檢測試劑盒
產品分類:PCR-熒光探針法
貨號:CP100323
產品規(guī)格:48T 0.2PCR管
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
10328-92-4 N-Methylisatoic anhydride 100mg Fructus viticis蔓荊子PCR鑒定試劑盒
1032900-25-6 LDK378 10mg Fructus viticis蔓荊子PCR鑒定試劑盒
1032900-25-6 LDK378 10mM(in1mLDMSO) Fructus hordei germinatus麥芽PCR鑒定試劑盒
1032900-25-6 LDK378 1g Semen strychni馬錢子PCR鑒定試劑盒
1032900-25-6 LDK378 200mg Radix ophiopogonis麥冬PCR鑒定試劑盒
中性蛋白酶Neutral Protease from Bacillus polymyxa質量規(guī)格:酶活:20萬u/g 10%中性Formalin固著液50毫升 登革熱病毒Ⅱ型(DFV-Ⅱ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
Tigecycline質量規(guī)格:含量>99.0% Mousecarbonicanhydrase2,CA-2ELISA試劑盒小鼠酶2(CA-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T HumanProteinase3Aibody,PR3AbELISA試劑盒人蛋白酶3抗體(PR3Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
(標準品)Tigecycline質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品 小鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒 ,英文名: Fbg ELISA Kit ELISAKitFree-T3小鼠游離狀腺原氨酸規(guī)格:48T/96T
替米考星Tilmicosin質量規(guī)格:干品度≥90.0%,干品含量≥85.0%,USP34 小鼠信號轉導分子(Smad1)ELISA檢測試劑盒Mousesignalansduction-Smad1ELISAKit 96T/48T HumanColonCancerAigen,CCAELISAKit人結腸癌抗原(CCA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
貝類甲肝病毒RNAPCR-熒光探針法檢測試劑盒腦成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)頭孢替坦Cefotetan acid 質量規(guī)格:Potency>960 mg,JP
PILRA Others Human 人 PILR-alpha / PILRA 人細胞裂解液 (陽性對照) AZD8055AZD-8055 質量規(guī)格:>98%,ATP競爭性的mTOR抑制劑
小鼠骨髓瘤細胞;Fox-NYAlectinib;CH5424802CH5424802 質量規(guī)格:>98%,ALK抑制劑
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163 瘤細胞,YAC-1細胞 RSMC細胞,大鼠主動脈平滑肌細胞對甲氧基肉桂酸p-Methoxycinnamic acid 質量規(guī)格:AR,99%
人肺細胞;HLF-a5-羥基色胺鹽酸鹽,血清胺鹽酸鹽Serotonin (5-HT)質量規(guī)格:>97%,BR
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。
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