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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測(cè)試劑盒>>熒光PCR法>> 48T空腸彎曲菌恒溫?zé)晒夥z測(cè)試劑盒
牛細(xì)小病毒(BPV)熒光-PCR法檢測(cè)試劑盒
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):空腸彎曲菌恒溫?zé)晒夥z測(cè)試劑盒
產(chǎn)品分類(lèi):恒溫?zé)晒夥?/span>
貨號(hào):CP100350
產(chǎn)品規(guī)格:48T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
1031799-40-2 NG-amino-L-Arginine (hydrochloride) 50mg Radix ginseng人參PCR鑒定試劑盒
1031799-40-2 NG-amino-L-Arginine (hydrochloride) 5mg Semen myristicae肉豆蔻PCR鑒定試劑盒
10318-16-8 Chloramphenicol Acetate 25mg Caulis lonicerae忍冬藤PCR鑒定試劑盒
10318-16-8 Chloramphenicol Acetate 5mg Radix ginseng人參PCR鑒定試劑盒
103192-40-1 H-Gly-Arg-pNA . 2 HCl 250mg Herba dianthi瞿麥PCR鑒定試劑盒
竹節(jié)香附素A(標(biāo)準(zhǔn)品)Raddeanin A質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片組織組蛋白H3-K4甲基化熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 HumanIerleukin1β,IL-1βELISAKit 人白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
梓醇(標(biāo)準(zhǔn)品)Catalpol質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatFactor-relatedApoptosis,FASELISA試劑盒大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T Humanmacrophagestimulatingprotein,MSPELISA試劑盒人巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
紫草素,左旋紫草素(標(biāo)準(zhǔn)品)Shikonin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠組織型纖溶酶原激活因子(tPA)ELISA試劑盒 ,英文名: tPA ELISA Kit 組織血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20
紫草酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Lithospermic acid質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 鴨白介素1(IL-1)ELISA檢測(cè)試劑盒DuckIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T Humanheparinassociatedaibody,HITELISAKit人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
空腸彎曲菌恒溫?zé)晒夥z測(cè)試劑盒臍靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)酮基他米巴羅汀Keto Tamibarotene質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/common magpie/Hong Kong/5052/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) ent-伏立康唑ent-Voriconazole質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
小鼠正常肝細(xì)胞;NCTC 1469 [NCTC1469]外消旋左旋甲狀腺素鈉DL-Levothyroxine 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA 小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細(xì)胞,NG108-15[108CC15]細(xì)胞 LM8細(xì)胞,C3H小鼠骨肉瘤細(xì)胞β-煙酰胺腺嘌呤二核苷1酸酸鈉鹽β-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate salt 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5硫酸腺嘌呤二水化合物Adenine Hemisulfate Dihydrate質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
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